【摘 要】
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该实验分别采用聚乙二醇-6000(polyethylene glycol 6000,PEG-6000)沉淀法制备人血浆高密度脂蛋白(PEG-HDL)和超速离心法制备人血浆高密度脂蛋白(high density lipoprotein,H
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该实验分别采用聚乙二醇-6000(polyethylene glycol 6000,PEG-6000)沉淀法制备人血浆高密度脂蛋白(PEG-HDL)和超速离心法制备人血浆高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)(d=1.063-1.21 g/cm<3>),用琼脂糖凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴定得到纯的HDL.分别给小鼠注射内毒素(lipopolysaccharides,LPS),LPS+PEG-HDL;LPS,LPS+HDL,LPS+HDL+无脂蛋白血浆(lipoprotein free fraction,LFF)(d>1.21 g/cm<3>);LPS,LPS+LFF;观察小鼠的死亡率和存活时间.结果显示HDL可以保护小鼠免受毒素的损伤,HDL起作用需要LFF的协同作用,但是LFF本身并不具备保护小鼠免受内毒素损伤的功能.我们用异硫氰酸荧光素酯标记的内毒素(fluorescein isothiocyanate-lipopolysaccharide,FITC-LPS,d=1.44 g/cm<3>)与人血浆培育后超速离心,观察FITC-LPS在人血浆中的分布.结果显示:FITC-LPS主要分布在密度为1.063-1.21 g/cm<3>(60.39％),而密度小于1.028g/cm<3>部分及密度为1.028-1.063g/cm<3>部分的FITC-LPS仅占0.28％和2.49％,这表明FITC-LPS与血浆培养后主要与HDL结合,极少量与LDL结合,而几乎不与VLDL相互作用.我们利用LPS+HDL、LPS+LFF、LPS+HDL+LEF及LPS分别与小鼠腹腔巨噬细胞培养后用ELISA方法测定培养上清液中巨噬细胞释放TNF-α的含量.结果表明HDL能够抑制LPS刺激巨噬细胞分泌TNF-α,LEF的加入能够加强这种抑制作用,但是LFF本身并不会对TNF-α的分泌有抑制作用.
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