G-四联体-Hemin生物模拟酶催化体系的研究及应用

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G-四联体结构是DNA的二级结构。形成G-四联体结构的含G序列通常存在于一些重要生理区域,如端粒和一些基因启动区域。因此G-四联体的研究在生理上具有重要的意义。G-四联体-hemin配合物具有过氧化物酶活性是DNA模拟酶的一种。但是目前关于DNA模拟酶的结构功能关系的研究还比较少,阻碍了这类模拟酶的进一步开发和应用。   本文利用G-四联体-hemin配合物能够催化H2O2与ABTS(2,2-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸))的反应,产物具有特征的绿色并在λ=414nm处有累计吸收的方法,比较了短链dXnGmXp(X=A T或C)序列尤其是dTnGmTp序列形成的分子间四链G-四联体-hemin配合物的过氧化物酶活性,同时研究了它们的CD(圆二色)光谱和pKa值。这些研究为DNA-hemin过氧化物模拟酶模型体系提供了更多的信息,并且帮助阐明了过氧化物模拟酶的作用方式和结构功能关系。比较了35个核酸d(G2Tn)3G2,d(G3Tn)3G3(n=1-4)和dG3TiG3TjG3TkG3(i=1-3,j=1-3,k=1-3)的催化活性和CD光谱,从而研究了具有过氧化物酶活性的DNA-hemin配合物的结构功能关系。结果显示G-四联体的构成是决定DNA-hemin配合物的过氧化物酶活性一个重要因素,平行结构的G-四联体-hemin配合物比反平行结构的具有更强的过氧化物酶活性。以观察结果为基础,利用在K+和Na+间竞争使G-四联体的结构发生转变,开发了一种新型的K+检测方法。这种方法能够在高浓度Na+存在下进行。检测通过肉眼即可判断,消除了对昂贵仪器的需要。以上述催化反应产生特征的绿色为基础,开发了一种简易、价廉的G-四联体稳定剂大批量筛选方法。由于G-四联体稳定剂与氯化血红素相互竞争作用减弱了氯化血红素与G-四联体的结合,最终导致反应体系颜色减弱甚至消失;而非稳定剂的加入不会对反应体系的颜色产生影响。利用该方法筛选了8种药物(四种正性,四种负性),并将筛选结果与G-四联体分子信标方法进行比较,验证了方法的可行性。
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