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【目的】探求PI3K和mToR双重抑制剂BEZ235单用及联合3-MA对胃癌细胞AGS的增殖、凋亡及自噬的作用,为胃癌的靶向治疗提供基础的实验依据。【方法】1、分别以含0.05μM、0.1μM、0.25μM、0.5μM、1μM、2μM BEZ235的DMEM高糖完全培养基(含10%胎牛血清)体外培养胃癌AGS细胞,培养24、48h后应用MTT法检测BEZ235对胃癌AGS细胞增殖情况。2、分别以含0.5mM、1mM、1.25mM、1.5mM、2mM、2.5mM 3-MA的DMEM高糖完全培养基(含10%胎牛血清)体外培养胃癌AGS细胞,培养24、48h后应用MTT法检测3-MA对胃癌AGS细胞增殖情况。3、将细胞分为四个组:对照组(以含DMEM高糖完全培养基培养)以下简称Control组;BEZ235组(以含0.5μM BEZ235的DMEM高糖完全培养基培养)以下称BEZ235组;3-MA组(以含2mM 3-MA的DMEM高糖完全培养基培养)以下称3-MA组;联合用药组(以含0.5μM BEZ235和2mM 3-MA的DMEM高糖完全培养基培养)以下简称Comb组。在普通倒置显微镜下观察细胞形态学变化,应用Counter Star自动细胞计数仪和MTT法检测细胞增殖情况;应用流式细胞仪检测细胞的凋亡率;Western Blot检测细胞的凋亡、自噬、信号通路情况。【结果】1.不加药物处理的对照组人胃癌AGS细胞呈现良好贴壁生长状态,而经不同浓度的BEZ235、3-MA处理的实验组人胃癌AGS细胞形态学上则发生了明显变化:扭曲、固缩、部分脱离壁底而呈悬浮生长,细胞数量明显减少;BEZ235能够抑制体外培养的人胃癌AGS细胞增殖,其增殖抑制率随着药物浓度增加和作用时间延长而增加,呈现明显量效和时效关系,单独用BEZ235组(P≤0.003)、单独用3-MA组(P≤0.006)及Comb组(P≤0.001)与对照组在细胞生存率上有显著差别,差别具有统计学意义。2.流式细胞仪检测显示,经BEZ235处理的AGS细胞凋亡率增高(Annexin V/PI双染法),增殖能力明显低于对照组,差别具有统计学意义(P=0.000);Comb组AGS细胞凋亡率明显高于BEZ235组,差别具有统计学意义(P=0.000)。3.Western Blot见BEZ235组活化型caspase-3、促凋亡蛋白Bax相对表达量逐渐升高,且均高于对照组;BEZ235组抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量逐渐减少,且均低于对照组,差别均具有统计学意义(p<0.05)。BEZ235组自噬相关蛋白LC3II/I、Beclin1相对表达量逐渐升高,且均高于对照组;BEZ235组P62相对表达量逐渐减少,且均低于对照组,差别均具有统计学意义(p<0.05)。BEZ235组PTEN相对表达量逐渐升高,且均高于对照组;BEZ235组Akt、p-Akt(Thr308)、mTOR相对表达量逐渐减少,且均低于对照组,差别均具有统计学意义(p<0.05)。Comb组活化型caspase-3、促凋亡蛋白Bax相对表达量均高于任何单药组和对照组;抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量均低于任何单药组和对照组,差别均具有统计学意义(p<0.05)。Comb组自噬相关蛋白LC3II/I、Beclin 1相对表达量低于BEZ235组;P62相对表达量高于BEZ235组,差别均具有统计学意义(p<0.05)。【结论】1.BEZ235能够抑制胃癌AGS细胞增殖,其增殖抑制作用呈明显量效和时效关系;BEZ235联合3-MA可以明显提高胃癌AGS细胞的凋亡率。2.BEZ235能够促进胃癌AGS细胞凋亡。3.BEZ235可能诱导胃癌AGS细胞产生保护性自噬。4.3-MA可抑制BEZ235引起的胃癌AGS细胞产生的自噬,且抑制自噬后细胞增殖能力下降,凋亡率提高。5.BEZ235抑制AKT与m TOR的表达。