【摘 要】
：
研究背景与目的该研究首先分析弓形虫不同分离株GRA7基因的异同;构建pGEX-4T-1/GRA7重组质粒大肠杆菌表达体系,实现目的蛋白的体外表达,并对目的蛋白的抗原性进行分析;用纯化
论文部分内容阅读
研究背景与目的该研究首先分析弓形虫不同分离株GRA7基因的异同;构建pGEX-4T-1/GRA7重组质粒大肠杆菌表达体系,实现目的蛋白的体外表达,并对目的蛋白的抗原性进行分析;用纯化的重组融合蛋白作为包被抗原,做ELISA,检测阴性、阳性血清,以期对其血清学诊断价值作出客观的评价,为新型弓形虫病诊断试剂盒的研制奠定基础.研究方法1.弓形虫不同分离株GRA7基因的保守性鉴定从弓形虫感染的小鼠腹水中提取不同分离株(RH株、ZS<,2>株和GT株)的基因组DNA,然后以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增,扩增产物电泳鉴定.利用三种限制性内切酶(Esp3I、CfrI和MboI)对目的基因进行酶切,并分析酶切产物.再将目的基因重组入载体pGEX-4T-1,送基因公司测序,序列对比分析.2.pGEX-4T-1/GRA7重组质粒的构建及GST融合蛋白的表达将质粒DNA和GRA7基因分别进行双酶切(BamHI、EcoRI),纯化、鉴定并连接酶切产物,转化感受态细菌,构建pGEX-4T-1/GRA7重组质粒.酶切、PCR鉴定,并送基因公司测序.优化蛋白表达条件,IPTG体外诱导表达,对表达的融合蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析.3.融合蛋白的纯化和应用利用GSTrap FF柱纯化融合蛋白,用纯化的融合蛋白作为包被抗原,做ELISA,检测阴性、阳性血清.研究结论1.弓形虫不同分离株(RH株、ZS<,2>株和GT株)GRA7基因具有高度保守性.2.构建了pGEX-4T-1/GRA7重组质粒,成功地在体外表达了重组融合蛋白,Western-blot证实重组融合蛋白具有抗原性.3.重组融合蛋白作为包被抗原具有一定的敏感性和特异性,提示其具有潜在的诊断抗原的价值.
其他文献
随着网络的发展,丰富的网络信息资源已经成为人们获取信息的主要途径。网络和信息技术的普及、信息资源的网络化为信息服务提供了便利条件。本文从网络信息资源和信息资源服
本文讨论了乳酸杆菌对生殖道上皮细胞的粘附和粘附拮抗作用,并比较了乳酸杆菌粘附Hela细胞后,对淋巴细胞杀伤作用的影响,同时比较了乳酸杆菌对单核巨噬细胞免疫调理作用和杀
目的:构建沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)原核表达载体pET22b(+)-MOMP,表达纯化MOMP;构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-MOMP,直接肌注小鼠,观察其所产生的体液免疫和细胞免疫应答
研究目的解析三个胞质GSTs的基因结构及其特点,克隆三个胞质GSTs基因,鉴定原核表达的重组GSTs的免疫反应性、免疫原性、催化活性及其免疫定位和抑制剂、常用抗寄生虫药对催化
摘要本文着重于旧本血吸虫(S.japonicum)表位疫苗的研究,包括以下两个部分:一日本血吸虫有效抗原表位的筛选.结果表明,获得了3种SjFer抗原表位,它们都具有部分的免疫保护性.
对一类含有范数有界参数不确定线性系统的混合Ｈ２／Ｈ∞状态反馈控制问题进行了研究． 给出了系统一个输出在满足给定的Ｈ∞干扰衰减约束条件下，其另一个输出的Ｈ２ 性能指标所满足的上界，并利
目的:运用在体实验的方法,以卡托普利为阳性对照药,观察蜂胶对高脂诱导的动脉粥样硬化(AS)的预防作用,并初步探讨其可能的机制,为进一步拓展蜂胶的临床应用提供实验依据.结论
讨论了状态空间形式下Ｔａｋａｇｉ和Ｓｕｇｅｎｏ提出的一类模糊系统的稳定性，利用矩阵范数和矩阵分析理论给出了判定该类系统稳定的新的充分条件。在此基础上分析了国产某飞机在地面滑行时纵向短周期
[目的]家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)是一种常见的常染色体单基因显性遗传性疾病,是导致动脉粥样硬化和早发冠心病的最重要危险因素.为探讨FH患者低
本文介绍近年来在电子鼻开发中取得的重大进展,以及模块式传感器系统(MOSES)的电子嗅觉在许多领域的应用前景。
This article describes the significant advances made in