论文部分内容阅读
目的:本文观察补肾强督治偻方对强直性脊柱炎动物模型免疫炎症的作用,以及对IL-23/Th17轴的影响。方法:选择使用BALB/c小鼠于第0天、第20天、第40天尾部皮下注射牛软骨来源蛋白聚糖构建蛋白聚糖诱导小鼠关节炎模型(PGIA),作为研究的强直性脊柱炎动物模型。在此基础上设置对照组、模型组、补肾强督治偻方组和塞来昔布组,每组10只。空白组为正常BALB/c小鼠,其余各组经过PGIA造模操作。在第61-90天,空白组、模型组小鼠给予生理盐水灌胃,补肾强督治偻方组小鼠给予临床等效剂量的补肾强督治偻方水提液灌胃,塞来昔布组小鼠给予临床等效剂量的塞来昔布溶液灌胃,每天一次。实验结束后处理小鼠,行各项实验指标观察。主要实验指标包括:用国际动物关节炎评分量表进行小鼠后爪关节肿胀评分;小动物活体成像仪对小鼠脊椎关节、爪关节肿胀情况进行观察;进行脾脏指数、胸腺指数(TI)测量;提取脾脏总淋巴细胞,CCK-8法测量细胞增殖影响,用流式细胞术分析Th17细胞比例;采集血清,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测量TNF-α、白介素IL-17、IL-23表达水平;提取肠壁组织总蛋白,并且ELISA法测量回肠IL-17、IL-23组织蛋白表达水平;用HE染色法、番红-固绿0染色对骶髂关节或腰椎、尾椎关节进行组织病理学观察,免疫组织化学染色法观察骨干内IL-17、IL-23的表达情况。成果:1、相对于对照组,BALB/c小鼠经商品化牛蛋白聚糖反复免疫后,自发出现后爪关节肿胀,关节炎评分显著增加(P<0.001);SI、TI指数显著上升(P<0.05);血清TNF-α表达水平显著升高(P<0.001);血清IL-17表达水平显著升高(P<0.001);IL-23表达水平较对照组显著升高(P<0.001);脾脏总淋巴细胞体外培养24小时后,活力较对照组显著下降(P<0.001);Th17细胞占总淋巴细胞比例升高;肠壁IL-17、IL-23蛋白表达水平与对照组相比无统计学意义(P>0.05);组织病理学染色显示PGIA小鼠骶髂关节软骨化生增多,骶髂关节逐渐融合,椎间盘炎症细胞浸润、纤维环结构破坏和血管生成,尾椎关节破坏,证明PGIA小鼠模型构建成功。PGIA小鼠骨干内IL-17阳性细胞鼠较对照组显著增加(P<0.001),IL-23同样显著表达(P<0.01)。2、相对于模型组,补肾强督治倭方组关节肿胀评分明显降低(P<0.05);SI、TI指数均有所降低;补肾强督治偻方水提液干预体外培养24小时后,对总淋巴细胞的活力较干预前显著增加(P<0.01),说明补肾强督治偻方水提液对PGIA小鼠脾脏总淋巴细胞有促进增殖作用;补肾强督治偻方组小鼠血清TNF-α表达水平较模型组显著下降(P<0.01);Th17细胞占总淋巴细胞比例较模型组无统计学意义;肠壁IL-17、IL-23蛋白表达水平与模型组相比无统计学意义(P>0.05);HE染色发现补肾强督治偻方组关节骨质破坏情况较模型组有所改善,关节面边缘较为整齐;同时椎间盘组织较为完整,少见淋巴细胞分布。番红-固绿染色发现补肾强督治偻方组骶髂关节较完整,椎间盘软骨破坏改善,尾椎融合现象减轻。补肾强督治偻方组骨干内IL-17阳性细胞鼠较对照组显著增加(P<0.001),IL-23同样显著表达(P<0.01),但表达与模型组相比均无统计学意义(P>0.05)。3、相对于模型组,塞来昔布组关节肿胀评分有所降低,SI、TI指数有所降低;塞来昔布溶液干预体外培养24小时后,对总淋巴细胞的活力较模型组显著增加(P<0.01),说明塞来昔布溶液对PGIA小鼠脾脏总淋巴细胞有促进增殖作用;塞来昔布组小鼠血清TNF-α表达水平较模型组有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05);Th17细胞占总淋巴细胞比例较模型组无统计学意义;肠壁IL-17、IL-23蛋白表达水平与模型组相比无统计学意义(P>0.05);HE染色发现塞来昔布组较模型组骶髂关节受累情况有所改善,但仍有轻微关节软骨细胞增生,椎间盘结构轻微破坏。番红-固绿染色发现塞来昔布组骶髂关节较完整,软骨细胞和少许血管生成。塞来昔布组小鼠骨干内IL-17阳性细胞鼠较对照组显著增加(P<0.001),IL-23同样显著表达(P<0.05),但表达与模型组相比均无统计学意义(P>0.05)。4、塞来昔布作为本研究中的阳性对照药,在降低关节肿胀评分、SI、TI,增加总淋巴细胞活力等方面,与补肾强督治倭方干预结果相似。补肾强督治偻方组在改善体内炎症,维持骶髂关节、椎间盘结构完整性方面稍微优于塞来昔布组;但在对骨干内IL-23、IL-17的调控作用上,塞来昔布有更好的下调趋势,不过二者与模型组相比均无统计学差异。结论:1、本研究证明PGIA小鼠模型构建成功,PGIA小鼠体内存在IL-23/Th17轴的失衡,可用于AS发病机制和靶向IL-23/Th17轴药物筛选的研究。2、本文数据表明,补肾强督治偻方干预可以改善PGIA小鼠炎症,改善骶髂关节和软骨破坏,说明补肾强督治偻方干预对PGIA小鼠模型具有确切的效果。3、补肾强督治偻方对PGIA模型体内改善免疫炎症状态和骨质破坏有明确的作用,但并非通过靶向IL-23/Th17轴起作用,推测可能通过其他的效应途径,其具体机制值得进一步探究。