RNA干扰对活化的小鼠脾淋巴细胞分泌TNFα的影响 目的 肿瘤坏死因子（tumor nectosis factor-α,TNF-α）由活化的巨噬细胞和T淋巴细胞产生,是一类重要的细胞因子,TNF-α具有广泛的生物学活性。最初对TNF-α功能的认识仅限于对肿瘤特异性杀伤作用,后来发现TNF-α也具有免疫调节作用,而且参与某些炎症反应过程。适量的TNF-α可以调节机体免疫功能,对维持机体内部的稳定状态及抵御各种致病因子具有重要意义,然而,TNF-α的异常分泌可作为机体炎症、损伤及休克的重要介质。目前已知与TNF-α有关的疾病包括:AIDS、贫血、自身免疫性疾病、肿瘤、出血性休克、移植排斥反应、结核病、白血病、糖尿病、类风湿性关节炎等。TNF-α参与了众多疾病的发生发展过程,因此,在不同水平上阻断TNF-α的作用,有可能对与TNF-α有关的疾病产生治疗作用。RNA干扰（RNA interference,RNAi）是利用具有同源性互补序列的双链RNA诱发序列特异性的转录后基因沉默现象,它可以通过抑制蛋白表达来模拟基因敲除技术,RNA干扰在植物、真菌及动物细胞中均存在,在抗肿瘤、抗病毒及研究基因功能等方面都有着广泛的应用前景。抑制效果有明显的高效性、特异性。本实验利用Silentgene^TM U6试剂盒在体外经PCR合成siRNA表达载体,利用脂质体转染入细胞后,转录出siRNA引发干扰。针对小鼠TNF-α基因选取2个靶位点,测定并比较其干扰效果,从而选出敏感的抑制位点,为今后克隆质粒提供最强的干扰序列。本文就位点1干扰作用加以论述。 方法 1.小鼠脾淋巴细胞的培养:C₅₇BL/6小鼠,雄性（中国医科大学动物部提供）,颈椎脱臼法处死,0℃无菌条件下取脾,尼龙网上研磨,过滤制成细