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本试验中小麦(Triticum aestivum L)品种洛夫林10和叶锈菌(Puccinia reconditaf.sp.tritici)生理小种260组成不亲和组合。首先利用药物学试验,预注射微管骨架稳定剂(Taxol)后接种叶锈菌小种260,观察其对寄主细胞过敏性反应(hypersensitivereaction,HR)的影响。结果表明,抑制了微管的动态变化导致寄主叶片发生HR的面积明显减少,并且随着注射药物浓度的增高,寄主细胞发生HR的面积逐渐减小。结合前期我们探讨的细胞骨架参与胞外钙内流的试验结果,本试验结果进一步证明了,微管骨架的动态变化可能参与了小麦抵抗叶锈菌侵染过程中钙信号的形成,从而影响到HR的诱发程度。我们先前的药物学试验结果显示,[Ca2+]cyt升高可能主要依赖于胞外钙离子的内流。为进一步证明这一推论,我们以完整的小麦植株为对象,采用焦锑酸钾沉淀法,结合透射电镜技术,预注射质膜钙通道抑制剂LaCl3后接种叶锈菌生理小种260,对小麦叶片的不同时间点钙离子分布进行了亚细胞定位,观察在阻断胞外钙进入胞质通道以后HR的诱发情况,同时观测胞质钙和胞内钙库的变化。结果显示:预注射质膜钙通道抑制剂LaCl3后再接种,明显抑制了胞外钙离子的进入,但胞质中钙离子的变化趋势与正常接种小麦相比表现基本一致,但在早期(8h~12h)钙离子的分布和数量在两种处理中却表现截然不同。后续的各时间点两种处理相比,无论在钙离子数量和分布上差异不大,细胞结构的变化趋势二者基本表现相似。这一结果说明,LaCl3的使用尽管抑制了胞外钙进入胞内,但寄主细胞仍能启动HR,暗示着在这一过程中胞内钙库可能参与了胞质钙信号的产生。为验证胞内钙库是否参与小麦-叶锈菌互作过程中HR的诱发,我们采用活体注射法给小麦叶片预注射不同浓度的胞内Ca2+螯合剂(BAPTA-AM)后接种叶锈菌小种260,发现螯合掉胞内钙离子导致寄主叶片发生HR的面积明显减少,且随着注射药物浓度的增高,寄主细胞发生HR的面积逐渐减小。而注射胞内Ca2+激活剂(caffiene)后接种,HR面积随cafiiene浓度增加而有所增加。进一步使用Ca2+通道抑制剂(EGTA、Herapin、RR和8-Br-cADPR)进行活体注射,试验结果表明,Herapin对HR的影响呈浓度依赖型,而RR和8-Br-cADPR没有明显作用。据此提出,胞内Ca2+可能参与了小麦抵抗叶锈菌侵染过程中钙信号的形成,这一过程主要通过IP3途径完成。综合药物学试验和小麦与叶锈菌互作体系中寄主细胞内钙离子的亚细胞定位及细胞超微结构观察结果,我们提出在小麦-叶锈菌互作过程中,胞外钙离子的内流和胞内钙库的释放共同参与了过敏性反应中胞质钙信号的形成。为进一步探讨钙参与小麦受叶锈菌侵染后诱发的细胞过敏性反应的信号传导途径提供了更加有力的试验证据。