蒙古牛和水牛BTG2启动子的克隆及功能分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qiuzhizhedetiantang
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BTG2是新型细胞抗增殖因子BTG/TOB基因家族成员之一,它是由神经生长因子诱导表达产生的一种分泌蛋白,属于瞬时早期反应基因。BTG2在猪和牛中均存在品种和个体表达差异。本研究选择蒙古牛和水牛BTG2启动子区进行研究,以阐明蒙古牛和水牛BTG2差异表达分子机理,获得如下结果:以蒙古牛和水牛基因组DNA为模板,分别克隆获得蒙古牛和水牛1708bp、1478bp的BTG2启动子序列。序列比对结果显示,相对于蒙古牛,水牛BTG2启动子存在269bp的缺失,生物信息学分析发现,该序列存在多个转录因子结合位点,这为后续多态性分析和功能鉴定奠定了基础。将蒙古牛和水牛BTG2启动子序列分别重组到哺乳动物表达载体pEGFP-N1中,获得瞬时表达载体pBTG2(p)-EGFP,并将它们分别导入HeLa细胞,神经生长因子诱导后,均检测到报道基因GFP表达,且蒙古牛BTG2启动子转录活性高于水牛,由此推测,水牛BTG2启动子区缺失的269bp片段很可能是导致该现象的根本原因。利用qRT-PCR检测BTG2在水牛、蒙古牛肌肉组织中的实时表达状况,由此揭示BTG2启动子区269bp缺失是否影响其转录。研究结果表明,与蒙古牛相比,水牛BTG2表达明显降低,这表明缺失的269bp DNA序列很可能与BTG2启动子活性直接相关。将蒙古牛BTG2启动子区较水牛多出的269bp片段与蒙古牛核蛋白相互作用。EMSA结果表明,在DNA含量相同的条件下,随着核蛋白浓度的增加,DNA与核蛋白的结合率呈上升趋势。该研究推测,这段DNA片段中可能存在与肉品质或抗寒相关的特定的顺式元件。该研究初步预测BTG2很可能是牛肉品质以及抗寒、抗旱能力的候选基因,这为BTG2的后续研究奠定了基础。
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