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第一部分F3肽介导载亚甲蓝及钆双胺纳米粒的制备及其性能检测
目的
1.制备一种F3肽介导的载亚甲蓝（MB, methylene blue）及钆双胺（Gd-DTPA-BMA）的聚乳酸-羟基乙酸（Poly-lactic-co-glycolic acid, PLGA）纳米粒（F3-PLGA@MB/Gd），检测其基本理化性质。
2.检测F3-PLGA@MB/Gd纳米粒的体外寻靶及穿膜特性。
3.检测F3-PLGA@MB/Gd纳米粒溶液声动力特性。
方法
1.利用高分子材料MAL-PEG-PLGA-F3，采用超声乳化法包裹材料MB及Gd-DTPA，制备F3-PLGA@MB/Gd纳米粒，并对其形态、粒径大小、表面电位以及MB、Gd的包封率和载药量进行检测。Gd的包封率及载药量用原子分光光度计（ICP）检测。采用CCK8法检测不同浓度的F3-PLGA@MB/Gd纳米粒对MB-231细胞毒性。
2.使用N，N-二甲基-4-亚硝基苯胺（RNO）作为指示剂检测溶液中的ROS产生情况。将1mL的RNO与组氨酸的混合溶液和1mL的F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒在 24 孔板中混合，并用超声基因转染治疗仪（1MHz，0.5W/cm2）处理1分钟，2分钟，4分钟和6分钟后，利用Lambda 950紫外分光光度计测试混合物在440nm波长下的吸收值。
3. 体外培养MDA-MB-231细胞及HUVEC细胞，并分别建立三维肿瘤球模型。制备 DiI-PLGA@MB/Gd 及 DiI-F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒，与MDA-MB-231细胞及HUVEC细胞共孵育0.5h，1h，2h，利用激光共聚焦检测纳米粒的细胞吞噬及三维肿瘤球的穿膜情况。
结果
1.成功制备了F3-PLGA@MB/Gd纳米粒，其混悬液肉眼观察呈淡蓝色，普通光镜下呈淡蓝色圆形，分散性好。透射电镜及扫描电镜下呈球体，粒径较均一，平均粒径为242.6±71.15nm（PDI = 0.218），zeta电位为-18.4±3.41mV；紫外分光光度法检测 MB 的包封率和载药率分别为41.53±3.30％和3.22±0.255％，根据ICP检测，Gd-DTPA-BMA的包封率和载药率分别为 29±9.46％和 2.44±0.796％。CCK8 检测 F3-PLGA@MB/Gd纳米粒有较好的生物相容性。
2.RNO在440 nm处的吸光度值随着超声作用时间的增加而降低。
3.成功制备 DiI-F3-PLGA@MB/Gd、DiI-PLGA@MB/Gd 纳米粒，并建立三维肿瘤细胞球模型。激光共聚焦观察可见F3靶向组纳米粒能靶向聚集MDA-MB-231细胞周围并进入细胞内，而HUVEC细胞组及非靶向组纳米粒组的细胞吞噬明显减少。在三维肿瘤细胞球中，顶层的荧光强度值F3靶向组比非靶向组高2.58倍，底层的荧光强度值F3靶向组高8.15倍。
结论
成功制备了F3-PLGA@MB/Gd纳米粒，其大小较均一，粒径小，形态规则，具有较高的包封率和载药量及良好的生物安全性。在超声辐照后F3-PLGA@MB/Gd纳米粒溶液能检测到ROS的产生，能被MDA-MB-231乳腺癌细胞快速摄取并具有显著的穿膜效果。
第二部分 F3肽介导载亚甲蓝及钆双胺纳米粒的体内寻靶及光声/磁共振显像的实验研究
目的
1.评估F3-PLGA@MB/Gd纳米粒的体内生物安全性及在荷MDA-MB-231肿瘤裸鼠体内的生物分布及肿瘤靶向效率；
2.评估 F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒的体外光声成像（Photoacoustic imaging，PAI）、磁共振显像（Magnetic resonance imaging，MRI）能力；
3、评估F3-PLGA@MB/Gd纳米粒的体内靶向MDA-MB-231移植瘤裸鼠的PAI、MRI显像能力；
方法
1.取20只昆明小鼠经尾静脉注射F3-PLGA@MB/Gd纳米粒。分别在注射前及注射后7天，15天，30天采集小鼠血清，评估各种血清生化参数（ALT，AST，CK，LDL-C，UA，Cn和BUN）的动态变化。将荷MDA-MB-231肿瘤的裸鼠分成两组，分别尾静脉内注射DiR-F3-PLGA@MB/Gd和DiR-PLGA@MB/Gd。通过IVIS Spectrum系统检测裸鼠体内荧光分布。在预定时间点（1小时，2小时，4小时，6小时，12小时，24小时）拍摄图像。24小时后处死裸鼠，并对肿瘤组织及离体脏器成像。DiI-F3-PLGA@MB/Gd和DiI-PLGA@MB/Gd用于进一步验证体内靶向效率。冷冻切片冷冻组织，通过CLSM评估组织切片。
2. 体外PA成像，将不同浓度的F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒溶液（5 mg/mL，7.5mg/mL，10mg/mL，15 mg/mL，20 mg/mL，25mg/mL放入凝胶模块中，并使用Vevo LAZR光声成像系统在710nm波长激发下检测 PA 强度变化。体外 MRI 成像，将具有不同稀释比的 F3-PLGA@MB/Gd纳米粒水溶液添加至离心管中，使用Philips Achieva 3.0T磁共振成像仪评估溶液的磁共振成像。
3.体内 PA 及 MR 成像：F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒溶液及PLGA@MB/Gd纳米粒溶液经尾静脉注射入荷MDA-MB-231瘤鼠体内后，在设定的时间点（1小时，2小时，4小时，6小时，12小时，24小时）对肿瘤进行PA及MR成像。实验参数如下：Vevo LAZR光声成像系统：波长：710nm；增益：50dB；深度：≤11mm。飞利浦Achieva 3.0T磁共振成像仪：TR / TE（ms）：0 / 2.2，min TR / TE（ms）：53 /2.2，扫描百分比：80.9％，NSA：4。
结果
1、昆明小鼠的各项生化指标（ALT，AST，CK，LDL-C，UA，Cn和 BUN）在接受 F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒注射前及注射后 7 天，15天，30天的检测水平保持稳定。在IVIS成像系统中，在所有时间点， F3靶向组中的肿瘤部位的荧光强度均高于非靶向组中的肿瘤部位的荧光强度。24小时后，F3靶向组肿瘤区域的荧光强度比非靶向组强2倍。
2、在体外光声成像中，在710nm的光激发下，PA信号强度随浓度的增加而增强，且最大浓度显示出最强的PA信号；在体外磁共振成像中，F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒溶液显示出 T1 强度值与溶液浓度呈正相关。
3、F3-PLGA@MB/Gd纳米粒可在肿瘤部位呈现高分辨率的PA和MR成像，并且在尾静脉注射后6小时后成像信号最强。相比之下，非靶向组中的PA和MRI信号都低得多，并且在肿瘤区域中未观察到对比信号增强。生理盐水组在双模态成像中均没有成像信号。
结论
F3-PLGA@MB/Gd 靶向纳米复合物，具有良好的体内生物安全性及体内寻靶能力。在体内磁共振成像及光声成像中，对荷MB-231乳腺癌移植瘤裸鼠均表现出良好的靶向肿瘤显影性能，是一种有效的靶向双模态显影剂。
第三部分 F3肽介导载亚甲蓝及钆双胺纳米粒声动力性能的检测及协同HIFU治疗的实验研究
目的：
1、细胞水平验证F3-PLGA@MB/Gd纳米粒声动力特征及对MB-231肿瘤细胞的杀伤作用；
2、在新鲜牛肝组织及荷 MB-231 瘤鼠中检测应用 F3-PLGA@MB/Gd纳米粒协同HIFU消融的实验效果。
方法：
1、细胞水平检测F3-PLGA@MB/Gd纳米粒在超声辐照后ROS的产生情况：将 MDA-MB-231 细胞与 PLGA，MB，PLGA@MB/Gd 或F3-PLGA@MB/Gd以1mg/mL的浓度温育3小时。在共聚焦皿底部用超声（1MHz，0.5w/cm2，30s）处理5组细胞。（1）通过DCFH-DA荧光探针，在激光共聚焦显微镜观察各组MB-231细胞内绿色荧光强度；（2）流式检测各组ROS曲线偏移情况。
2、细胞水平检测 F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒在超声辐照后的细胞毒性作用：分组及超声处理同前；（1）在超声辐照后向六孔板中加入10％CCK8（100μL）溶液，并通过ELX800 UniversalMiemp酶标仪检测450nm处的OD值；（2）通过流式细胞术检测细胞凋亡情况。
3、SDT协同HIFU消融实验：（1）体外实验在新鲜牛肝组织中进行，实验分为5组：HIFU组，HIFU+PBS组，HIFU+PLGA组，HIFU+MB组和HIFU+PLGA@MB/Gd组。HIFU消融参数（120W，3s）。（2）体内实验将30只荷MB-231肿瘤裸鼠分成6组（n = 5）：Ⅰ组（HIFU）， Ⅱ组（HIFU+PBS），Ⅲ组（HIFU+PLGA），Ⅳ组（HIFU+MB），Ⅴ组（HIFU+PLGA@MB/Gd）和Ⅵ组（HIFU+F3-PLGA@MB/Gd）。在Ⅱ-Ⅵ 组中，通过尾静脉（200μL）注射试剂，6小时后将裸鼠麻醉侧卧位置于HIFU治疗台上（120W，3s）。采用Gray Val 1.0软件定量分析消融前后的肿瘤部位的超声图像灰度值变化。通过HIFUJupiter 1.0软件计算凝固坏死体积。在HIFU消融后1h取出肿瘤并用4％多聚甲醛固定。HE染色用于组织病理学检测。增殖细胞核抗原（PCNA）和TdT介导的 dUTP 缺口末端标记（TUNEL）用于评估靶组织中的增殖和凋亡，并计算各组增殖指数（PI）和凋亡指数（AI）。
结果：
1、激光共聚焦显微镜下F3-PLGA@MB/Gd+US组显示出最强的绿色荧光。流式检测ROS可见，F3-PLGA@MB/Gd NPs介导的SDT组中荧光曲线比其他组更显著地右移。
2、FCM 评估 MB-231 细胞凋亡结果显示 F3-PLGA@MB/Gd+US组早期及晚期凋亡、坏死细胞数量显著增加（ 53.86 ± 3.34 ）％，而PLGA@MB/Gd+US组，MB+US组，PLGA+US组，Cell+US组和无US辐照对照组的凋亡和坏死细胞占比分别为（28.76±5.06）％，（19.20± 5.13）％，（14.08±3.39）％，（4.96±1.33）％和（3.09±1.24）％。CCK8检测细胞存活率可见对照组（无超声辐照）没有明显的细胞死亡，而所有实验组（超声辐照）均表现出不同程度的细胞活力下降， F3-PLGA@MB/Gd组细胞存活率最低（p＜0.05）。
3、（1）在离体牛肝实验中，PLGA@MB/Gd+HIFU组（63.91±6.42 mm3）的凝固性坏死体积在5组中最为显著，几乎是HIFU组（7.53± 1.86 mm3）的9倍，而PLGA@MB/Gd+HIFU组的坏死体积约为PLGA+HIFU组的3倍（21.73±6.86 mm3），约为MB+HIFU组的2倍（30.72 ±6.86mm3）。（1）在MDA-MB-231瘤鼠肿瘤消融实验中：在HIFU刺激后，肿瘤组织的声学信号在不同组中显著变化，其中 F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒组在 HIFU 消融前后的平均灰度差异显著高于对照组Ⅰ组-Ⅴ组（P＜0.05）。HE染色中，Ⅰ组至Ⅵ组在HE染色后表现出不同程度的凝固性坏死，消融区和非消融区之间的边界在V至VI组中最为明显。PCNA和TUNEL免疫组织化学染色结果显示，在HIFU刺激后，PCNA的表达在第Ⅰ组显著，第Ⅱ组至第Ⅵ组的表达呈下降趋势。TUNEL检测显示，与其他5组相比，第Ⅵ组细胞凋亡率最高（P ＜0.05）。
结论：
1、F3-PLGA@MB/Gd纳米粒具有良好的声动力性能，在细胞水平能对肿瘤细胞有较好的杀伤作用。
2、在体外及体内水平，F3-PLGA@MB/Gd纳米粒均能与HIFU协同治疗，增强消融治疗效果。
目的
1.制备一种F3肽介导的载亚甲蓝（MB, methylene blue）及钆双胺（Gd-DTPA-BMA）的聚乳酸-羟基乙酸（Poly-lactic-co-glycolic acid, PLGA）纳米粒（F3-PLGA@MB/Gd），检测其基本理化性质。
2.检测F3-PLGA@MB/Gd纳米粒的体外寻靶及穿膜特性。
3.检测F3-PLGA@MB/Gd纳米粒溶液声动力特性。
方法
1.利用高分子材料MAL-PEG-PLGA-F3，采用超声乳化法包裹材料MB及Gd-DTPA，制备F3-PLGA@MB/Gd纳米粒，并对其形态、粒径大小、表面电位以及MB、Gd的包封率和载药量进行检测。Gd的包封率及载药量用原子分光光度计（ICP）检测。采用CCK8法检测不同浓度的F3-PLGA@MB/Gd纳米粒对MB-231细胞毒性。
2.使用N，N-二甲基-4-亚硝基苯胺（RNO）作为指示剂检测溶液中的ROS产生情况。将1mL的RNO与组氨酸的混合溶液和1mL的F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒在 24 孔板中混合，并用超声基因转染治疗仪（1MHz，0.5W/cm2）处理1分钟，2分钟，4分钟和6分钟后，利用Lambda 950紫外分光光度计测试混合物在440nm波长下的吸收值。
3. 体外培养MDA-MB-231细胞及HUVEC细胞，并分别建立三维肿瘤球模型。制备 DiI-PLGA@MB/Gd 及 DiI-F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒，与MDA-MB-231细胞及HUVEC细胞共孵育0.5h，1h，2h，利用激光共聚焦检测纳米粒的细胞吞噬及三维肿瘤球的穿膜情况。
结果
1.成功制备了F3-PLGA@MB/Gd纳米粒，其混悬液肉眼观察呈淡蓝色，普通光镜下呈淡蓝色圆形，分散性好。透射电镜及扫描电镜下呈球体，粒径较均一，平均粒径为242.6±71.15nm（PDI = 0.218），zeta电位为-18.4±3.41mV；紫外分光光度法检测 MB 的包封率和载药率分别为41.53±3.30％和3.22±0.255％，根据ICP检测，Gd-DTPA-BMA的包封率和载药率分别为 29±9.46％和 2.44±0.796％。CCK8 检测 F3-PLGA@MB/Gd纳米粒有较好的生物相容性。
2.RNO在440 nm处的吸光度值随着超声作用时间的增加而降低。
3.成功制备 DiI-F3-PLGA@MB/Gd、DiI-PLGA@MB/Gd 纳米粒，并建立三维肿瘤细胞球模型。激光共聚焦观察可见F3靶向组纳米粒能靶向聚集MDA-MB-231细胞周围并进入细胞内，而HUVEC细胞组及非靶向组纳米粒组的细胞吞噬明显减少。在三维肿瘤细胞球中，顶层的荧光强度值F3靶向组比非靶向组高2.58倍，底层的荧光强度值F3靶向组高8.15倍。
结论
成功制备了F3-PLGA@MB/Gd纳米粒，其大小较均一，粒径小，形态规则，具有较高的包封率和载药量及良好的生物安全性。在超声辐照后F3-PLGA@MB/Gd纳米粒溶液能检测到ROS的产生，能被MDA-MB-231乳腺癌细胞快速摄取并具有显著的穿膜效果。
第二部分 F3肽介导载亚甲蓝及钆双胺纳米粒的体内寻靶及光声/磁共振显像的实验研究
目的
1.评估F3-PLGA@MB/Gd纳米粒的体内生物安全性及在荷MDA-MB-231肿瘤裸鼠体内的生物分布及肿瘤靶向效率；
2.评估 F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒的体外光声成像（Photoacoustic imaging，PAI）、磁共振显像（Magnetic resonance imaging，MRI）能力；
3、评估F3-PLGA@MB/Gd纳米粒的体内靶向MDA-MB-231移植瘤裸鼠的PAI、MRI显像能力；
方法
1.取20只昆明小鼠经尾静脉注射F3-PLGA@MB/Gd纳米粒。分别在注射前及注射后7天，15天，30天采集小鼠血清，评估各种血清生化参数（ALT，AST，CK，LDL-C，UA，Cn和BUN）的动态变化。将荷MDA-MB-231肿瘤的裸鼠分成两组，分别尾静脉内注射DiR-F3-PLGA@MB/Gd和DiR-PLGA@MB/Gd。通过IVIS Spectrum系统检测裸鼠体内荧光分布。在预定时间点（1小时，2小时，4小时，6小时，12小时，24小时）拍摄图像。24小时后处死裸鼠，并对肿瘤组织及离体脏器成像。DiI-F3-PLGA@MB/Gd和DiI-PLGA@MB/Gd用于进一步验证体内靶向效率。冷冻切片冷冻组织，通过CLSM评估组织切片。
2. 体外PA成像，将不同浓度的F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒溶液（5 mg/mL，7.5mg/mL，10mg/mL，15 mg/mL，20 mg/mL，25mg/mL放入凝胶模块中，并使用Vevo LAZR光声成像系统在710nm波长激发下检测 PA 强度变化。体外 MRI 成像，将具有不同稀释比的 F3-PLGA@MB/Gd纳米粒水溶液添加至离心管中，使用Philips Achieva 3.0T磁共振成像仪评估溶液的磁共振成像。
3.体内 PA 及 MR 成像：F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒溶液及PLGA@MB/Gd纳米粒溶液经尾静脉注射入荷MDA-MB-231瘤鼠体内后，在设定的时间点（1小时，2小时，4小时，6小时，12小时，24小时）对肿瘤进行PA及MR成像。实验参数如下：Vevo LAZR光声成像系统：波长：710nm；增益：50dB；深度：≤11mm。飞利浦Achieva 3.0T磁共振成像仪：TR / TE（ms）：0 / 2.2，min TR / TE（ms）：53 /2.2，扫描百分比：80.9％，NSA：4。
结果
1、昆明小鼠的各项生化指标（ALT，AST，CK，LDL-C，UA，Cn和 BUN）在接受 F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒注射前及注射后 7 天，15天，30天的检测水平保持稳定。在IVIS成像系统中，在所有时间点， F3靶向组中的肿瘤部位的荧光强度均高于非靶向组中的肿瘤部位的荧光强度。24小时后，F3靶向组肿瘤区域的荧光强度比非靶向组强2倍。
2、在体外光声成像中，在710nm的光激发下，PA信号强度随浓度的增加而增强，且最大浓度显示出最强的PA信号；在体外磁共振成像中，F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒溶液显示出 T1 强度值与溶液浓度呈正相关。
3、F3-PLGA@MB/Gd纳米粒可在肿瘤部位呈现高分辨率的PA和MR成像，并且在尾静脉注射后6小时后成像信号最强。相比之下，非靶向组中的PA和MRI信号都低得多，并且在肿瘤区域中未观察到对比信号增强。生理盐水组在双模态成像中均没有成像信号。
结论
F3-PLGA@MB/Gd 靶向纳米复合物，具有良好的体内生物安全性及体内寻靶能力。在体内磁共振成像及光声成像中，对荷MB-231乳腺癌移植瘤裸鼠均表现出良好的靶向肿瘤显影性能，是一种有效的靶向双模态显影剂。
第三部分 F3肽介导载亚甲蓝及钆双胺纳米粒声动力性能的检测及协同HIFU治疗的实验研究
目的：
1、细胞水平验证F3-PLGA@MB/Gd纳米粒声动力特征及对MB-231肿瘤细胞的杀伤作用；
2、在新鲜牛肝组织及荷 MB-231 瘤鼠中检测应用 F3-PLGA@MB/Gd纳米粒协同HIFU消融的实验效果。
方法：
1、细胞水平检测F3-PLGA@MB/Gd纳米粒在超声辐照后ROS的产生情况：将 MDA-MB-231 细胞与 PLGA，MB，PLGA@MB/Gd 或F3-PLGA@MB/Gd以1mg/mL的浓度温育3小时。在共聚焦皿底部用超声（1MHz，0.5w/cm2，30s）处理5组细胞。（1）通过DCFH-DA荧光探针，在激光共聚焦显微镜观察各组MB-231细胞内绿色荧光强度；（2）流式检测各组ROS曲线偏移情况。
2、细胞水平检测 F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒在超声辐照后的细胞毒性作用：分组及超声处理同前；（1）在超声辐照后向六孔板中加入10％CCK8（100μL）溶液，并通过ELX800 UniversalMiemp酶标仪检测450nm处的OD值；（2）通过流式细胞术检测细胞凋亡情况。
3、SDT协同HIFU消融实验：（1）体外实验在新鲜牛肝组织中进行，实验分为5组：HIFU组，HIFU+PBS组，HIFU+PLGA组，HIFU+MB组和HIFU+PLGA@MB/Gd组。HIFU消融参数（120W，3s）。（2）体内实验将30只荷MB-231肿瘤裸鼠分成6组（n = 5）：Ⅰ组（HIFU）， Ⅱ组（HIFU+PBS），Ⅲ组（HIFU+PLGA），Ⅳ组（HIFU+MB），Ⅴ组（HIFU+PLGA@MB/Gd）和Ⅵ组（HIFU+F3-PLGA@MB/Gd）。在Ⅱ-Ⅵ 组中，通过尾静脉（200μL）注射试剂，6小时后将裸鼠麻醉侧卧位置于HIFU治疗台上（120W，3s）。采用Gray Val 1.0软件定量分析消融前后的肿瘤部位的超声图像灰度值变化。通过HIFUJupiter 1.0软件计算凝固坏死体积。在HIFU消融后1h取出肿瘤并用4％多聚甲醛固定。HE染色用于组织病理学检测。增殖细胞核抗原（PCNA）和TdT介导的 dUTP 缺口末端标记（TUNEL）用于评估靶组织中的增殖和凋亡，并计算各组增殖指数（PI）和凋亡指数（AI）。
结果：
1、激光共聚焦显微镜下F3-PLGA@MB/Gd+US组显示出最强的绿色荧光。流式检测ROS可见，F3-PLGA@MB/Gd NPs介导的SDT组中荧光曲线比其他组更显著地右移。
2、FCM 评估 MB-231 细胞凋亡结果显示 F3-PLGA@MB/Gd+US组早期及晚期凋亡、坏死细胞数量显著增加（ 53.86 ± 3.34 ）％，而PLGA@MB/Gd+US组，MB+US组，PLGA+US组，Cell+US组和无US辐照对照组的凋亡和坏死细胞占比分别为（28.76±5.06）％，（19.20± 5.13）％，（14.08±3.39）％，（4.96±1.33）％和（3.09±1.24）％。CCK8检测细胞存活率可见对照组（无超声辐照）没有明显的细胞死亡，而所有实验组（超声辐照）均表现出不同程度的细胞活力下降， F3-PLGA@MB/Gd组细胞存活率最低（p＜0.05）。
3、（1）在离体牛肝实验中，PLGA@MB/Gd+HIFU组（63.91±6.42 mm3）的凝固性坏死体积在5组中最为显著，几乎是HIFU组（7.53± 1.86 mm3）的9倍，而PLGA@MB/Gd+HIFU组的坏死体积约为PLGA+HIFU组的3倍（21.73±6.86 mm3），约为MB+HIFU组的2倍（30.72 ±6.86mm3）。（1）在MDA-MB-231瘤鼠肿瘤消融实验中：在HIFU刺激后，肿瘤组织的声学信号在不同组中显著变化，其中 F3-PLGA@MB/Gd 纳米粒组在 HIFU 消融前后的平均灰度差异显著高于对照组Ⅰ组-Ⅴ组（P＜0.05）。HE染色中，Ⅰ组至Ⅵ组在HE染色后表现出不同程度的凝固性坏死，消融区和非消融区之间的边界在V至VI组中最为明显。PCNA和TUNEL免疫组织化学染色结果显示，在HIFU刺激后，PCNA的表达在第Ⅰ组显著，第Ⅱ组至第Ⅵ组的表达呈下降趋势。TUNEL检测显示，与其他5组相比，第Ⅵ组细胞凋亡率最高（P ＜0.05）。
结论：
1、F3-PLGA@MB/Gd纳米粒具有良好的声动力性能，在细胞水平能对肿瘤细胞有较好的杀伤作用。
2、在体外及体内水平，F3-PLGA@MB/Gd纳米粒均能与HIFU协同治疗，增强消融治疗效果。