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第一部分:建立大鼠心肌细胞缺氧损伤模型目的:探索并建立稳定的大鼠心肌细胞缺氧再灌注损伤模型。方法:首先常规培养大鼠心肌细胞H9C2,加入不同浓度的致缺氧化学制剂--连二亚硫酸钠进行缺氧处理,分为缺氧培养2小时和缺氧培养4个小时两组,然后弃去含有连二亚硫酸钠的培养基,换成正常的培养基复氧培养1小时,检测细胞的存活率,细胞乳酸脱氢酶释放量、脂质氧化情况和活性氧浓度,评估缺血缺氧模型效果。结果:利用连二亚硫酸钠溶液做缺氧/复氧处理后,随着药物浓度的增加,显微镜下可见细胞存活细胞越来越少,折光性降低,外形由长梭形变为椭圆形。缺氧2小时组和缺氧4小时组中,当连二亚硫酸钠溶液浓度大于3m M时,心肌细胞的存活率发生明显的下降,LDH的释放量增多,脂质氧化显著升高,活性氧含量升高。结论:利用连二亚硫酸钠可建立稳定的大鼠心肌离体细胞损伤模型。连二亚硫酸钠本身不会损伤大鼠心肌细胞。当连二亚硫酸钠浓度达到3m M时,与对照组和低浓度药物组相比,细胞存活率降低,但活性氧浓度、LDH含量及脂质氧化情况均有明显升高。第二部分Galectin-1在缺氧损伤模型中对心肌细胞的作用目的:探讨Galectin-1蛋白对缺氧再灌注损伤的大鼠心肌细胞的作用及相关机制研究方法:首先利用不同浓度的重组大鼠Galectin-1蛋白刺激缺氧/复氧后的H9C2细胞,观察其对细胞存活率和细胞凋亡率的的影响;然后通过构建慢病毒载体并转染H9C2细胞过表达Galectin-1蛋白,建立缺氧损伤模型后,检测Galectin-1的表达量与细胞缺氧损伤后的细胞存活率和凋亡率,最后探究Galectin-1发挥相应作用的信号通路蛋白表达变化。结果:在细胞损伤后加入重组Galectin-1蛋白后,可使H9C2细胞的增殖率升高,而细胞凋亡下降。与正常组相比,缺氧后的Galectin-1表达量下降,转染过表达Galectin-1的慢病毒载体后H9C2细胞表达Galectin-1明显升高,且损伤的H9C2细胞凋亡率降低。缺氧组与正常组相比AKT、P38、ERK三种蛋白相应的磷酸化程度均下降,而过表达Galectin-1蛋白后其磷酸化又显著增多。结论:外源性的重组Galectin-1蛋白对缺氧再灌注损伤的心肌细胞具有一定的保护作用。心肌细胞内过表达Galectin-1蛋白可以减轻缺氧后的细胞损伤。Galectin-1蛋白可能是通过AKT、P38和ERK信号通路发挥保护缺氧损伤后的心肌细胞的作用。