【摘 要】
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MicroRNA PC-3p-40996（PC-40996）是在快速生长期的马鹿（Cervus elaphus）鹿茸中发现的一类新的mi RNA分子。靶基因预测结果显示,在钙离子信号通路中发挥重要作用的钙调蛋白（CALM1）和钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶2D（CAMK2D）是PC-40996的潜在靶标。为探索PC-40996在鹿茸软骨细胞中的生物学功能,本研究通过荧光素酶实验、Western blot
【基金项目】
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国家自然科学基金（31671283）；
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MicroRNA PC-3p-40996（PC-40996）是在快速生长期的马鹿（Cervus elaphus）鹿茸中发现的一类新的mi RNA分子。靶基因预测结果显示,在钙离子信号通路中发挥重要作用的钙调蛋白（CALM1）和钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶2D（CAMK2D）是PC-40996的潜在靶标。为探索PC-40996在鹿茸软骨细胞中的生物学功能,本研究通过荧光素酶实验、Western blot实验研究PC-40996对CALM1和CAMK2D的调控作用。此外,本研究还对PC-40996在癌症细胞中的生物学功能做了探索性研究。结果显示:（1）当PC-40996模拟物（mimics）和control mimics分别与CALM13’UTR野生型重组质粒共转染293T细胞时,实验组的荧光素酶活性相比于对照组有显著下降;当PC-40996 mimics和control mimics分别与CALM1 3’UTR突变型重组质粒共转染293T细胞时,实验组的荧光素酶活性相比于对照组无显著变化。荧光素酶实验证实CALM1 3’UTR区域有PC-40996的结合位点。（2）当PC-40996 mimics和control mimics分别与CAMK2D 3’UTR野生型重组质粒共转染293T细胞时,实验组的荧光素酶活性相比于对照组有显著下降;当PC-40996和control mimics分别与CAMK2D 3’UTR突变型重组质粒共转染293T细胞时,实验组的荧光素酶活性相比于对照组无显著变化。荧光素酶实验证实CAMK2D 3’UTR区域有PC-40996的结合位点。（3）在鹿茸软骨细胞中过表达PC-40996时,Western blot实验结果显示内源的CALM1与CAMK2D蛋白表达量显著下降,证实PC-40996对CALM1与CAMK2D的靶向调控作用。（4）在人乳腺癌细胞（MCF7）和人肝癌细胞（Huh7）中过表达PC-40996时,细胞迁移、增殖实验结果显示癌细胞的侵袭、增殖能力得到显著增强。研究表明:PC-40996具有生物学功能,调控MCF7细胞和Huh7细胞的增殖与迁移;PC-40996可以特异性靶向CALM1与CAMK2D m RNA的3’UTR,负调控内源CALM1与CAMK2D基因表达。
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