论文部分内容阅读
2013年,我国首次报道新型H7N9禽流感病毒（H7N9病毒）感染人类,并造成大量死亡病例。抗H7N9病毒药物有限,对其开展快速检测和抗病毒药物研究迫在眉睫,本文开展以下三部分研究:第一部分,抗H7N9病毒血凝素（HA）蛋白单克隆抗体（单抗）制备。以H7N9病毒疫苗（A/ZJU01/PR8/2013）免疫BALB/c小鼠,通过ELISA筛选获得6株单抗,其中4株（1H10、2D5、2A9和2C6）属于Ig G1亚型,2株（2D1和2F5）Ig G2a亚型。通过ELISA检测分析显示均与HA蛋白具有强亲和力,其中2D1的效价达2×10-4ug/m L。免疫荧光实验表明所有单抗与其他亚型流感病毒无交叉反应,具有较好特异性。第二部分,H7N9病毒胶体金试纸条和ELISA试剂盒研制。基于抗体特性和配对实验,单抗2D5和2F5分别作为捕获抗体和检测抗体,组装了胶体金试纸条和ELISA试剂盒,两种方法检测H7N9病毒（A/Zhejiang/DTID-ZJU01/2013）的灵敏度分别为21和2-2HAU/100u L。对检测H7N9病毒特异性好,具有潜在应用价值。第三部分,单抗对感染H7N9病毒小鼠的预防和治疗作用。用5倍半数致死剂量的高致病性H7N9病毒感染小鼠,再以10mg/kg剂量的抗体治疗,单抗1H10和2D1分别通过中和作用和抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用,对小鼠能起到了有效保护作用。提示这两株单抗对高致病性H7N9病毒具有保护作用。综上所述,本研究得到以下结论:（1）本研究获得6株单抗,均能特异性识别H7N9病毒,具有较好亲和力。（2）利用单抗2D5和2F5,组装了检测H7N9病毒的胶体金试纸条和ELISA试剂盒,为H7N9疫情防控提供技术支持。（3）单抗1H10和2D1具有显著的预防和治疗效果,具有潜在的应用前景。