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牛支原体（Mycoplasma bovis,M.bovis）是感染牛的一种重要的致病性病原体,能够引起肺炎、乳房炎、耳炎、生殖道炎、关节炎、角膜结膜炎等疾病,统称牛支原体相关疾病（Mycoplasma bovis-associated disease,Mb AD）。牛支原体在世界范围内流行,给全世界养殖业造成了巨大的经济损失,本研究初步了解了19株牛支原体的生物学特性,并对其中一株08M株进行了生长特性研究及免疫原性评价。对19株牛支原体进行传代培养并观察菌落形态,发现19株牛支原体接种于Thiaucourt’s液体培养基培养约12 h后,培养基颜色由红色变为橙黄色,pH由7.4下降至6.8左右,接种于固体培养基约3 d后,显微镜下均能观察到典型的“煎蛋状”菌落,有中心脐。提取19株牛支原体的全菌蛋白,进行SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示19株牛支原体蛋白条带大小和数量基本一致,数量在1820条之间,与08M株高免血清反应,19株出现的免疫条带大小、数量和强弱基本一致。对本实验室分离的15株中国株进行多位点序列分型（Multilocus sequence typing,MLST）,发现15株中国株均为ST10型。鉴于此,结合实验室前期对08M株进行的致病性试验,对其生长特性和免疫原性进行了进一步研究。,将牛支原体08M株以70 CCU/mL的初始接种量接种于Thiaucourt’s培养基（体积比为3:5）,在110 h内每隔5 h同时监测其颜色变化单位（Color change units,CCU）、菌落形成单位（Colony forming units,CFU）、菌体蛋白浓度和核酸含量的变化,绘制相应曲线。活菌计数方法（CCU和CFU）显示,牛支原体生长可分为明显的四期,10 h进入对数期,30 h进入稳定期,活菌数最高可达108 CCU/m L和7.7×107 CFU/mL,75 h进入衰亡期;蛋白浓度从15 h开始迅速增长,至35h蛋白浓度最高,为72.06μg/mL,此后维持在58.3870.65μg/mL;核酸含量从15 h开始增长,至25 h后Ct值维持在15.3217.84之间。在08M株培养的对数生长期末收集菌体,用0.01M pH 7.2 PBS洗涤三次后,浓缩成高浓度和低浓度的两种抗原,用二乙烯亚胺（BEI）灭活后,混合MONTANIDETM ISA 201 VG佐剂试制出抗原浓度分别为0.74 mg/mL和0.23 mg/mL的灭活疫苗。用试制的两种疫苗分别以2 mL/头的剂量,经颈部皮下注射免疫89月龄牛两次,两次免疫间隔时间为28 d,同时设置阴性对照组和空白对照组,二免后28 d进行攻毒试验,结果显示:两种灭活疫苗免疫牛后均能产生较高水平的血清抗体,攻毒后28 d对所有试验牛进行解剖,发现免疫组和对照组试验牛肺部均有不同程度的病变,且都能够分离出牛支原体或PCR检测结果为阳性。结果表明,此次试制的两个不同抗原浓度的牛支原体灭活疫苗免疫动物后均能够刺激机体产生很好的抗体反应,但却没有保护作用。