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背景与目的:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是常见的消化道恶性肿瘤之一。近年来中国结直肠癌发病率和死亡率有所上升。大黄(庶虫)虫丸是出自《金匮要略》的经方,千百年来被广泛用于治疗癥瘕积聚。本研究希望阐明大黄(庶虫)虫丸是否通过改善肝纤维化,从而抑制结直肠癌的肝转移。方法:利用脾注射过表达绿色荧光蛋白的MC38-EGFP细胞建立C57BL/6J小鼠结直肠癌肝转移模型,在体观察大黄(庶虫)虫丸对结直肠癌肝转移的影响。提取小鼠血清外泌体,通过Label-free蛋白质组学分析差异蛋白。通过QPCR检测mRNA的表达,通过免疫组化,免疫荧光与蛋白免疫印迹检测蛋白表达。通过Masson染色检测肝脏胶原沉积。所有统计通过SPSS完成。结果:1.大黄(庶虫)虫丸抑制结直肠癌生长及肝转移。利用MC38-EGFP脾注射构建小鼠结直肠癌肝转移模型。相比模型组,大黄(庶虫)虫丸显著降低脾脏中肿瘤大小,重量及荧光强度,大黄(庶虫)虫丸显著降低肝脏绿色荧光强度及转移灶数目。2.大黄(庶虫)虫丸通过调控肝纤维化抑制肝转移前微环境形成。Masson染色和免疫组化显示,模型组中胶原沉积和纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达显著增加,大黄(庶虫)虫丸治疗后显著降低。Spearman相关分析显示,FN所代表的肝脏ECM重构与肝转移灶呈正相关关系。3.大黄(庶虫)虫丸调节外泌体CCL2介导的巨噬细胞浸润和表型。血清外泌体的Label-free蛋白质组学显示,趋化因子CC趋化因子配体-2(CCchemokineligand-2,CCL2)在模型组中上调,但在大黄(庶虫)虫丸治疗后又下调。QPCR和蛋白免疫印迹显示,肝脏CCL2及其受体CCR2的mRNA表达在模型组中上调,但在大黄廑虫丸治疗后下调。Spearman相关分析表明,CCL2 mRNA的相对表达水平与肝转移呈正相关关系。CCL2诱导巨噬细胞募集。免疫组化结果显示,相比空白对照组,模型组肝脏中巨噬细胞标志物F4/80表达显著增加,CCR2+F4/80+巨噬细胞比例显著增加,但大黄(庶虫)虫丸治疗后均显著下降。大黄(庶虫)虫丸降低在模型组中上调的活化的TGF-β1和FN的表达。免疫荧光结果显示,相比起空白对照组中,模型组M1型巨噬细胞比例显著降低,M2型巨噬细胞比例显著升高。与模型组相比,大黄(庶虫)虫丸处理显著上调M1型巨噬细胞、降低M2型巨噬细胞比例。4.抑制纤维化和CCR2减少结直肠癌肝转移。纤维化抑制剂Pirfenidone和CCR2抑制剂CCR2-RA-[R]抑制肠癌肝转移,减少TGF-β1调控的肝纤维化。结论:大黄(庶虫)虫丸抑制CCL2介导的巨噬细胞M2极化,改善肝纤维化微环境,抑制结直肠癌肝转移。