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胶原蛋白是骨有机基质的重要组成部分,其水解产物胶原肽具有促进氨基酸吸收和蛋白质合成、抗骨质疏松、降血压、抗氧化等生理活性。本文利用水产加工副产物罗非鱼皮为原料制备胶原肽,通过研究胶原蛋白肽的制备工艺,探究胶原肽促进成骨细胞增殖分化活性,以期获得具有特定功效的胶原肽产品,提高罗非鱼副产物的附加值。文章分析了罗非鱼皮原料的基本组成。鱼皮干基中蛋白质占90.30%,其中胶原蛋白含量占总蛋白66.90%。采用石油醚脱脂48h以净化胶原基质,脱脂率达62.2%。比较四种商品酶制剂对罗非鱼皮的水解能力,其中动物蛋白酶和风味酶水解度较高。采用正交实验分别对两种酶水解条件优化,结果显示两种酶最适水解条件一致。采用动物蛋白酶和风味酶双酶复合水解,酶用量均为4000U/g蛋白,在55℃、pH7.5下对罗非鱼皮水解不同时间(5h、8h、22h),比较所得胶原肽(H5、H8、H22)对大鼠成骨细胞增殖分化活性的影响,以Ⅰ型胶原酶酶解罗非鱼皮5.5h制得的胶原肽Hc为阳性对照。结果表明,随酶解时间延长,胶原肽促进成骨细胞增殖活性提高,其中H8、H22(lmg/mL)增殖率分别为140.35%和144.21%,两者差异不显著,但与空白对照组有显著差异；同时两者对成骨细胞分化均具有一定的促进作用。对H5、H8、H22的水解度、相对分子质量分布和氨基酸组成进行分析。结果显示,随酶解时间延长,水解度提高,相对分子质量降低,H5、H8、H22相对分子质量小于1000Da的组分分别占94.73%、95.56%、97.58%,平均相对分子质量分别为351.39Da、324.6Da、253.06Da。同时,H5、H8、H22的氨基酸组成较接近,符合典型水产胶原蛋白的氨基酸组成,但也有一定的差异,脯氨酸的含量逐渐降低,羟脯氨酸含量增多。将H8先采用截留分子量为800-1000Da纳滤膜进行分级,收集渗透液1(Permeatel, P1)和截留液1(Retentatel, R1),比较两者活性强弱；将活性强的组分用截留分子量为400-600Da纳滤膜进行分级,收集渗透液2(Permeate2, P2)和截留液2(Retentate2, R2),比较两者活性强弱。结果表明与R1相比,P1促进成骨细胞增殖分化活性较强,细胞增殖率和分化促进率分别达126.92%和131.77%。R2与P2对成骨细胞增殖分化均有一定的促进作用,但P2活性更强,细胞增殖率和分化促进率分别达130.48%和120.72%,均达到了He的活性水平。对R2、P2的相对分子质量分布和氨基酸组成进行分析。结果显示,两者存在较大差异。P2相对分子质量小于1000Da的组分占98.65%,平均相对分子质量为184.62Da；R2相对分子质量小于1000Da的组分占96.14%,平均相对分子质量为319.59Da。氨基酸组成方面,P2中甘氨酸和丙氨酸共占67.2%,其余氨基酸中只有脯氨酸含量超过5%,达到6.1%,另外胶原蛋白的特征氨基酸羟赖氨酸含量增加了125%；R2中除脯氨酸含量增加了30%、羟赖氨酸增加100%外,其他均与H8接近。胶原肽促进成骨细胞增殖分化的活性或许跟这两种氨基酸,或含有这两种氨基酸的多肽有关。P2活性虽然最高,但得率极低。而P1与R2活性差异不大,考虑成本粉末细腻,溶解性好,达到SB/T10634-2011《淡水鱼胶原蛋白肽粉》对一级产品的质量要求,胶原粗肽得率为18.20%,精制肽得率为6.67%。