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研究背景：刚地弓形虫是一种广泛寄生于人和动物有核细胞内的原虫,可引起人兽共患弓形虫病,严重威胁着人类健康和畜牧业生产。由于抗弓形虫药物不能达到理想的治疗效果,研制安全有效的疫苗来预防和控制弓形虫病成为当前的研究热点。研究目的：构建编码弓形虫棒状体蛋白ROP16和致密颗粒蛋白GRA7基因片段的DNA复合疫苗,以及能表达小鼠共刺激分子B7-2的重组质粒作为分子佐剂,免疫接种昆明小鼠,评价疫苗的保护效果,以及分子佐剂的添加对疫苗诱导的免疫应答的影响,为优化弓形虫DNA疫苗免疫效果提供新思路。研究方法：使用PCR技术分别扩增弓形虫抗原ROP16和GRA7基因以及小鼠共刺激分子B7-2基因,经TA克隆回收各目的片段,在测序正确后,亚克隆至真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组真核表达载体pEGFP-ROP16. pEGFP-GRA7、 pEGFP-ROP16-GRA7和pEGFP-B7-2;经PCR、双酶切和测序鉴定后,瞬时转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察、SDS-PAGE和Western blotting分析检测目的蛋白的表达情况；大量抽提重组质粒用于制备弓形虫DNA疫苗与基因佐剂B7-2,经肌肉注射昆明小鼠,检测分析接种前后小鼠细胞免疫与体液免疫指标的变化；最后进行攻击感染实验,观察小鼠生存时间,评价疫苗和佐剂的保护效果。实验结果：构建了重组真核表达质粒pEGFP-ROP16、pEGFP-ROP16-GRA7和pEGFP-B7-2,经PCR、双酶切和DNA测序鉴定正确,各目的基因片段完整准确连接到表达载体上。pEGFP-ROP16、pEGFP-GRA7、pEGFP-ROP16-GRA7和pEGFP-B7-2转染的HEK293T细胞在荧光显微镜下观察均可看到绿色荧光,抽提的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting分析,均能检测到目的蛋白。动物实验数据显示,复合基因疫苗pEGFP-ROP16-GRA7组比单基因疫苗组和对照组诱导出更高水平的抗弓形虫IgG、IgG2a、IFN-γ和CD8+/CD4+,小鼠中位生存时间也有所延长；分子佐剂B7-2共免疫组与单用疫苗组相比上述指标得到进一步提高(P<0.05)；而各组间IgG1、IL-4和IL10水平无显著性差异。结论：弓形虫棒状体抗原ROP16基因与致密颗粒抗原GRA7基因均可诱导昆明小鼠特异性的抗弓形虫体液免疫、Thl型和CD8+T细胞反应；ROP16和GRA7的复合基因疫苗比单一基因疫苗具有更强的保护性免疫；分子佐剂B7-2的使用有效增强了各抗原诱导的细胞免疫和体液免疫。