前言 CD44分子是广泛分布于血管内皮细胞、血细胞、淋巴细胞、成纤维细胞等细胞的重要粘附分子,与配体透明质酸、胶原蛋白、纤维连接素等结合后介导了淋巴细胞“归巢”和转化、肿瘤转移、信号传导等生理或病理过程。其分子胞浆侧与细胞骨架蛋白锚蛋白相连接,并存在一个高度特异性结合区域,此区域内含有PKC磷酸化位点。研究证实PKC对此位点的磷酸化能显著增强二者结合力。研究还发现,PKC活化对CD44变构体及ICAM-1、VCAM-1等粘附分子的表达有调节作用。因此,我们利用PMA活化HU-VECs PKC来观察PKC活性对血管内皮细胞CD44的表达及粘附性有无影响。锚蛋白是连接CD44跨膜糖蛋白与细胞内骨架网络的桥梁。在淋巴细胞上,研究发现PKC活化可引起细胞内锚蛋白的重新分布。那么,在血管内皮细胞上会不会也出现这种情况呢?并由此改变细胞骨架网络的立体结构而造成细胞的形态及细胞之间连接关系的变化,从而影响内皮细胞通透性呢?由于锚蛋白与CD44相连,如果有锚蛋白的移位,会不会同时牵动CD44的移位?我们利用免疫荧光标记法观察PKC活化后HUVECs CD44、锚蛋白的分布情况。PKC是一种信使传递酶,CD44分子与配体结合后胞内Ca²⁺升高,而PKC是第二信使Ca²⁺及DAG的靶蛋白,Ca²⁺升高必然会引发PKC活化,通过其磷酸化作用将刺激信号传递下去。那么,信号传导的实际途径如何呢?Raf-1激酶是细胞内许多生物学信号传导第一步,可以接受酪氨酸激酶家族或PKC的活化,并进而引起酶链反应:Raf-1→MEK→ERK。我们利用PKC激活剂及抑制剂来观察HUVECs CD44基因的表达及CD44分子磷酸化情况,对Raf-1激酶活性进行分析,并比较了Raf-1激酶、MEK、ERK抑制剂对HUVECs CD44基因表达的影响,观察PKC能否直接活化上述途径,据此探讨PKC对CD44分子表达的信号调控