论文部分内容阅读
目的：应用深度增强成像技术研究不同阶段的糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)和糖尿病黄斑水肿(diabetic macular edema, DME)黄斑区脉络膜厚度变化,建立视网膜muller细胞原代培养体系,探讨不同阶段DR与PPARy基因单核苷酸多态性的相关性及其影响因素。方法：选择正常志愿者共120例,年龄25～85岁。根据研究对象不同年龄分组。深度增强成像相干光断层扫描测量脉络膜厚度。分析黄斑中心凹脉络膜厚度(subfoveal choroidal thickness, SFCT)与年龄的相关性。收集2型糖尿病患者92例(92眼),共分为3组：A组(DR-/DME-):无DR无DME组36例(36眼)；B组(NPDR+/DME-):无DME的非增生性糖尿病视网膜病变(Non-proliferative diabetic retinopathy, NPDR)组47例(47眼)；C组(PDR+/DME-):无DME的增生性糖尿病视网膜病变(Proliferative diabetic retinopathy, PDR)组9例(9眼),分别比较组间脉络膜厚度的差异、各组与正常人群脉络膜厚度的差异。选择DME33例33眼,采集指标：空腹血糖、糖化血红蛋白(Glycosylated hemoglobin, HbAlc)、总胆固醇(Total cholesterol, TC)、甘油三酯(Triglycerides, TG)、高密度脂蛋白(High-density lipoprotein, HDL)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein, LDL)等。比较DME与正常人群及不同阶段DR的脉络膜厚度。分析糖尿病病程、空腹血糖、HbAlc、TG、TC、LDL、HDL、UAER等因素与DME脉络膜厚度变化的相关性。另选择不同阶段DR120例120眼,直接测序法检测PPARγpro12Ala位点基因型,比较不同阶段DR等位基因和基因型频率分布差异,分析等位基因和基因型与DR发生的相关性；分析PPARy基因pro12Ala位点多态性与不同阶段DR的相关性。进一步探讨不同等位基因与TG、LDL、HDL、HbAlc、UAER等临床生化指标的相关性。同时应用改良方法进行体外原代培养并纯化鉴定SD大鼠视网膜muller细胞,为下一步研究提供实验基础。结果：正常人群平均SFCT为(271.32±35.63)μm男性SFCT平均值为(286.32±35.98)μm,60名女性为(254.33±39.61)μm,男性平均SFCT高于女性,且两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄组之间SFCT差异有统计学意义(P<0.001)。随着年龄的增加,SFCT逐渐减小,与年龄呈负相关(r=-0.781,P<0.001)。A组：(DR-/DME-)的SFCT为145-306μm,平均为(271.19±34.68)μm,与正常对照人群的平均SFCT进行比较,差异无统计学意义(P>0.05)。B组：(NPDR+/DME-)的SFCT为176～336μm,平均为(259.64±37.79)μm,与正常对照的平均SFCT比较差异无统计学意义(P>0.05)。C明：(PDR+/DME-)的SFCT为171～289μm,平均(232.98±34.13)μm,与正常对照的平均SFCT比较,脉络膜明显变薄,且差异具有统计学意义(P<0.05)。D组：(NPDR+/DME+)的SFCT为156～278μm,平均为(229.64±33.66)μm,与正常对照45～65岁(含)年龄组的平均SFCT(270.78±35.97)μm比较,脉络膜明混变薄,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。D组与B组及正常人群比较,D组脉络膜明显变薄,且差异具有统计学意义(P<0.01)。HbAlc、LDL、UAER水平是DME发生的危险因素,其Exp(B)分别是5.512(P<0.001)；2.821(P=0.017)；1.582(P=0.009)。合并DME的NPDR脉络膜厚度与LDL和UAER具有相关性(r=-0.601、-0.673,P<0.01),而与糖尿病病程、空腹血糖、HbAlc TG、TC、HDL、肌酐、收缩压及舒张压均无相关性(r-=-0.253、0.219、0.095、0.310、0.185、0.224、0.237、0.421、0.281,P>0.05)。通过胰蛋白酶多次反复短时间消化,以谷氨酰胺合成酶为特异性抗体进行细胞鉴定,体外培养的muller细胞形态一致,谷氨酰胺合成酶反应阳性。DR患者PPARy基因G等位基因的分布频率为5.8%,PDR和NPDR患者基因型均以C/C型为主导,所占比例分别为87%和89.2%,二者之间差异无统计学意义。不同基因型全身主要生化指标比较显示：与CC基因型的DR患者相比,G/G或G/C基因型患者UAER水平明显降低,具有统计学差异,而TG、LDL、HDL、HbAlc水平差异无统计学意义。结论：正常中国人平均SFCT为271.32±35.63gm,各年龄段男性平均SFCT高于女性。随着年龄的增加,SFCT逐渐减小,与年龄呈负相关。鼻侧脉络膜均最薄。随着DR加重,脉络膜厚度呈降低趋势。无DR的PDR患者脉络膜较正常人及无DR糖尿病患者均明显变薄,与无DME的NPDR目比,合并DME的NPDR脉络膜显著变薄。LDL和UAER水平与DME脉络膜厚度呈负相关。胰蛋白酶反复消化培养是一种可靠的获得较为纯化、表达稳定的muller细胞体外原代培养的方法。PPARy基因pro12Ala位点的基因型和等位基因的分布频率与DR的发生,以及不同阶段的DR无明确相关性；但PPARγ基因G等位基因可能减低DR患者UAER值,对其肾脏功能可能具有一定保护作用。