论文部分内容阅读
氨基酸不仅是蛋白质合成的底物,而且可以调控蛋白质的合成。最近体外试验验证Leu、Ile、Met、Thr可以影响酪蛋白的合成速率,且Ile和Leu对mTOR磷酸化具有促进作用。本试验通过单一缺失不同浓度的Leu、Ile、Met、Thr,来观察其对奶牛乳腺上皮细胞及蛋白信号相关通路的影响。试验一:Leu含量为正常培养基浓度的0、25%、50%、75%、100%时,奶牛乳腺上皮细胞的增殖情况没有显著差异(P=0.95),但在数值上有上升的表现,缺失相同比例的Met、Thr时,情况与之相同(P值分别为0.89、0.97)。而Ile随着含量的增加,在细胞增殖上具有下降的表现,但在统计上没有显著差异(P=0.97)。试验二:本试验用完全缺失这四种氨基酸的培养基作为对照组,来观察单一缺失其中一种氨基酸时对信号通路相关mRNA表达量的影响。当缺失Leu时,4eBP1的表达量相对于对照组,均显著降低(P<0.01)。而mTOR、S6K1、Akt、eEF2的mRNA表达量均没有显著差异(P值分别为0.51,0.28,0.62,0.16)。当缺失Ile时,4eBP1的表达量与对照组相比呈现先下降后上升的趋势(P=0.08),当添加Ile时,mTOR、AKT、eEF2的mRNA表达量显著降低,之后随着Ile浓度的增加表达量有增加的趋势(P<0.01)。当添加Met时,4eBP1表达量与对照组相比有下降的趋势(P<0.05),而其它四种mRNA没有显著差异。而缺失Thr时,该5种mRNA均没有显著差异。试验三:设计与试验二相同,当Leu浓度到达25%时,mTOR的磷酸化程度显著升高(P<0.01),而eEF2、Akt、S6K1的磷酸化程度没有显著差异;Ile的Akt磷酸化程度具有先降低后升高的趋势,mTOR在100%Ile浓度时磷酸化程度显著升高(P<0.01),而eEF2没有显著差异;Met的Akt磷酸化在含量为75%、100%有下降的趋势(P=0.37),而S6K1在浓度为50%、75%、100%时磷酸化程度显著高于前三组,而添加浓度为0、25%时,与对照组相比没有显著差异(P<0.01);Thr的mTOR磷酸化比例在含量为0%、75%时显著高于其他组(P=0.08),Akt磷酸化程度随着该氨基酸的添加显著降低,而添加量为100%时有回升的趋势,其它浓度间无显著差异(P<0.01),S6K1的磷酸化水平随Thr的添加逐渐降低,在50%Thr时最低,之后缓慢回升(P<0.01)。综上所述,Leu、Ile、Met、Thr这四种氨基酸单一梯度缺失对细胞增殖没有影响,而对蛋白信号通路的一些mRNA表达量及蛋白磷酸化程度产生影响,证实了这四种氨基酸的信号作用,同时也说明氨基酸之间可能存在拮抗作用。