【摘 要】
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目的观察泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(MuRF2)在HL-1心肌细胞自噬中的作用。方法采用慢病毒转染技术上调和下调心肌细胞HL-1 MuRF2的表达。实验分为阴性对照组、阳性对照组(空载病毒对照)、雷帕霉素处理组、MuRF2过表达组和MuRF2敲减组。用雷帕霉素处理细胞,Western blot检测自噬蛋白LC3和BNIP3的表达。透射电镜观察HL-1心肌细胞超微结构。结果(1)Western bl
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目的观察泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(MuRF2)在HL-1心肌细胞自噬中的作用。方法采用慢病毒转染技术上调和下调心肌细胞HL-1 MuRF2的表达。实验分为阴性对照组、阳性对照组(空载病毒对照)、雷帕霉素处理组、MuRF2过表达组和MuRF2敲减组。用雷帕霉素处理细胞,Western blot检测自噬蛋白LC3和BNIP3的表达。透射电镜观察HL-1心肌细胞超微结构。结果(1)Western blot验证,MuRF2过表达组中MuRF2蛋白表达水平均高于阴性对照组、阳性对照组、雷帕霉素处理组(P均<0.05),MuRF2敲减组中MuRF2蛋白表达水平均低于阴性对照组、阳性对照组、雷帕霉素处理组(P均<0.05)。(2)Western blot结果表明,雷帕霉素处理组LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达均高于阴性对照组(P均<0.05),MuRF2过表达组LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达均低于雷帕霉素处理组(P均<0.05)。与阴性对照组相比,雷帕霉素处理组及MuRF2敲减组的LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达升高(P均<0.05),雷帕霉素处理组和MuRF2敲减组在LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达上无差异(P>0.05)。透射电镜显示,雷帕霉素处理组线粒体分裂、碎片化,自噬体和自噬溶酶体散在胞质内。MuRF2过表达组线粒体处于融合状态,自噬体明显减少。结论MuRF2抑制雷帕霉素诱导的心肌细胞线粒体自噬。
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