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背景及目的:变应性鼻炎(Allergic Rhinitis,AR)是一种常见的,由过敏原暴露引发的鼻粘膜变态反应性疾病,其主要特点为血清特异性IgE上升及鼻粘膜中增加的Ⅱ型细胞因子。近来研究表明,二型固有淋巴细胞(Group 2 Innate Lymphoid cells,ILC2)在AR发病机制中发挥了作用。ILC2是一种新发现的固有免疫细胞,其具有与TH2细胞相似的效应功能。ILC2本身不表达任何抗原特异性受体。当过敏原暴露后,ILC2响应上皮细胞来源的IL-33、IL-25激活并释放IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子是其调节免疫反应的主要途径。然而,目前ILC2在AR中的研究仍处于起步阶段。ILC2响应何种机制调节其细胞因子分泌参与AR的发生和发展,对此仍然没有被很好的理解。MiR-155是一种与免疫功能关系密切的功能性非编码RNA。MiR-155被证实通过调节多种免疫细胞功能参与AR等过敏性疾病的发生发展。在我们课题组及其它研究团对的体内实验中,miR-155参与调节AR等过敏性气道炎症模型中ILC2数量和功能。然而,miR-155在体外是否参与调节ILC2功能以及通过何种何种调节机制还没有很好的研究。因此,本研究的目的是了解miR-155在体外是否调节ILC2功能并探索其调控机制。方法:1、采集AR患者外周血并分离单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。ILC2通过免疫磁珠分选从外周血PBMC中分离并进行体外培养。免疫荧光染色及流式细胞术用于检测ILC2的分离纯度。2、通过转染miR-155 mimics或miR-155 inhibitor对ILC2中miR-155表达进行干预,并在IL-33和IL-25刺激下,使用RT-qPCR及ELISA检测ILC2中IL-4、IL-5、IL-13表达及分泌。3、从miRBD、TargetScan、miRTarBase三个数据库分别预测miR-155靶基因并取三者交集,结合GEO数据库中ILC2芯片数据筛选出可能参与ILC2功能的靶基因,并通过RT-qPCR验证。双荧光素酶实验验证miR-155靶向TP53INP13’UTR。4、将miR-155 mimics与TP53INP1过表达载体共转染至ILC2中,在IL-33和IL-25活化下,ELISA检测ILC2培养上清中IL-4、IL-5、IL-13分泌以评价过表达TP53INP1是否改变miR-155对ILC2功能的调节作用。结果:1、荧光显微镜计数结果显示,分选前ILC2占外周血PBMC比例为0.18%(0.18±0.016%),经磁珠分选后ILC2比例为73.7%(73.70±2.17%)。流式细胞术显示,ILC2占外周血PBMC比例由分选前的4.69%(4.69±0.16%),提高到70.94%(70.94±0.071%)。2、RT-qPCR结果显示过表达miR-155可以提高ILC2中IL-4和IL-13 mRNA表达;下调miR-155表达可以抑制上述因子mRNA表达。然而,IL-5 mRNA表达未发现明显变化。ELISA结果显示,上调miR-155表达可促进ILC2分泌IL-4,IL-5,和IL-13;降低miR-155表达可以抑制上述因子的分泌。3、通过靶基因预测,我们得到110个较为可信的靶基因。结合芯片数据我们发现其中有9个靶基因可能参与ILC2功能。RT-qPCR验证结果显示,在这些靶基因中,过表达miR-155可以抑制HBP1、CREBRF、TLE4、TP53INP1、KBTDB2表达。双荧光素酶实验结果显示miR-155可以靶向结合TP53INP1 3’UTR。4、ELISA结果显示,与对照组相比,过表达TP53INP1可以部分抑制过表达miR-155诱导的IL-4、IL-13分泌,而IL-5的分泌未发现显著变化。结论:MiR-155可以通过靶向TP53INP1 3’UTR抑制TP53INP1表达,从而调节ILC2功能。