论文部分内容阅读
马铃薯(Solanum tuberosum L.)是世界第四大粮食作物,在工农业生产中具有十分重要的作用,但马铃薯生产过程中易感染多种病毒,进而导致马铃薯品种种性退化、品质和产量降低,因此马铃薯病毒的脱除及检测是马铃薯种薯生产的重要环节,但目前采用的茎尖分生组织培养脱毒技术由于操作精细、成苗慢而难以大规模操作,建立快速适于大批量脱毒的脱毒技术成为马铃薯生产的迫切需求。本研究旨在获得一种可用于大批量处理的马铃薯病毒高效脱除体系,并完善一种能同时检测多种主要马铃薯病毒及类病毒的试剂盒,为马铃薯产业健康发展提供良好的技术支持。主要研究结果如下: 1.病毒唑在马铃薯病毒脱除中的作用研究:实验以分别带有PVA、PLRV、PVS、PVX、PVY的马铃薯试管苗和PVM、PVS和PVY复合侵染的试管苗为材料,采用4种不同浓度的病毒唑处理,结果分析表明75mg/L、100mg/L处理的试管苗中PVA、PVM、PLRV、PVS、PVX等病毒能被有效地脱除,但病毒唑对PVY无明显的效果。通过qPCR分析表明,病毒唑处理在初始阶段能大幅度降低植株体内病毒含量,直至后期检测不到病毒,且后期继代培养过程中病毒含量也无明显增加,遗传稳定性SSR分析表明抑制剂处理材料与其对照间的遗传变异无明显差异,说明该方法能有效地脱除马铃薯主要病毒且可用于生产实际。 2.吗胍?乙酸对主要马铃薯病毒脱除效果研究:实验设计3种吗胍·乙酸浓度,结果表明,在浓度为400mg/L的浓度下,5个处理周期可以有效地脱除PVA,通过qPCR分析表明,PVA在吗胍·乙酸的处理过程中呈不断下降的趋势,在第5个周期植株体内病毒含量极低,且后期继代培养过程中病毒含量无明显增加,但是对PVS、PVM、PVY不存在着明显的脱除作用。 3.m-RT-PCR马铃薯病毒检测试剂盒优化:在本实验室前期研究的基础上,通过对内参引物与各病毒扩增特异性引物选择以及反应条件优化,建立了一种包含内参阳性对照,能同时检测6种主要马铃薯病毒和一种类病毒的m-RT-PCR反应体系,并完成试剂盒的合成。实践应用和灵敏度检测表明该试剂盒准确度明显高于DAS-ELISA,其灵敏度能达到0.16ng/μL,部分病毒甚至到达1.6×10-3ng/μL,因此具有更好的应用前景。