论文部分内容阅读
DNA是至今发现的绝大多数生物遗传信息的携带者。DNA复制机制保证了细胞分裂期间遗传信息的复制和传递，是维持生物遗传稳定性的前提。DNA复制过程涉及几十种蛋白和酶的参与以确保遗传信息被准确而及时的复制。 研究DNA复制对人类疾病，特别是肿瘤及传染病的机理探索有至关重要的意义。然而参与真核生物(包括人类)DNA复制的酶系非常复杂，对真核生物DNA复制机制的研究面临着诸多挑战。细菌的DNA复制系统相对简单，但其复制酶系与真核生物差别较大。古菌的复制酶系与真核生物的复制酶系相似，而且相对简单。因此古菌可以作为研究真核生物DNA复制的一个简易模型。本文参照本课题组总结的T.kodakarensis菌中DNA复制蛋白的互作网络，关联分析了这些蛋白在P.pacificus菌中的同源基因，并建立了这些同源基因的重组表达载体库和蛋白库，为今后开展蛋白组学研究奠定了基础。 本文还研究了PCNA与其互作蛋白的关系，并探索了可能的调控机制。一些古菌可编码一个小蛋白Tip，它能够抑制复制蛋白PCNA三聚环结构的形成，进而抑制DNA复制。由于结构性的原因，野生型Tip蛋白不适宜用来解析PCNA-Tip复合物的晶体结构。本研究对来自P.pacificus菌的Tip蛋白进行了一系列改造，找到了一个依然能够与PCNA互作的突变型Tip多肽，它对于研究PCNA-Tip复合物的晶体结构和互作表位非常有利。本文还利用荧光标记核酸结合PAGE方法，对GAN蛋白在不同二价离子环境下的生化性质进行了研究。此外本文还尝试利用一代测序结合统计学方法，对DNA聚合酶的保真性进行研究并初步将该方法用于商业化聚合酶的品质分析。