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多巴胺受体和腺苷受体在体内共定位于基底神经节中GABA能中型棘状神经元中,日益增多的证据显示腺苷受体和多巴胺受体特异亚型之间拮抗性的受体间相互作用构成了基底神经节综合机制的一个重要方面。鉴于多巴胺神经系统在人类躯体运动和情感认知活动中的重要作用,人们开始关注腺苷在精神分裂症、帕金森病等人类疾病中对多巴胺神经系统的调节作用。腺苷受体激动剂和拮抗剂作为独具潜力的药物已分别用于精神分裂症和帕金森病动物模型的研究。因此研究腺苷对多巴胺神经系统的调节作用可能为帕金森症和精神分裂症等疾病的治疗提供新的思路。本论文主要对腺苷Ai受体活化对多巴胺Di受体功能的调节作用进行了研究。
本文作者首先建立了稳定共表达腺苷A1受体与多巴胺D1受体的HEK293细胞系。配体结合实验结果表明,在该细胞系中,D1受体与其激动剂SKF38393的结合更倾向于单结合位点的结合,A1受体激动剂CPA能够剂量依赖性地降低D1受体与激动剂SKF38393的亲和力。激光共聚焦成像实验显示A1受体和D1受体在细胞膜上存在共定位,荧光能量共振转移实验结果还表明,这两种受体在生理条件下存在异源二聚现象。此外,A1受体拮抗剂DPCPX可降低SKF38393的Ki值,提高D1受体对SKF38393的亲和力,这表明细胞所释放的内源性腺苷等物质能够通过A1受体调节D1受体的功能。在细胞内第二信使水平,本实验采用CRE-SEAP法检测D1受体活化引起的细胞内cAMP的生成情况。实验发现,CPA可剂量依赖性地抑制SKF38393引起的cAMP的升高,同时,G1蛋白的特异性抑制剂百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)能够拮抗低浓度CPA的这种作用,但不能完全拮抗高浓度CPA的作用。对细胞内另一重要的第二信使——细胞内钙信号进行检测发现,D1受体活化可引起细胞内钙的明显升高,而在共表达细胞中,这一效应可完全被高浓度的CPA阻断。对cAMP以及内钙信号的研究显示A1受体活化还可在第二信使水平上拮抗D1受体的功能。上述结果表明A1受体与D1受体不仅在配体结合水平上,而且在第二信使水平上都存在着拮抗作用。
本论文还研究了A1受体活化对D1受体功能长时程的影响,实验发现A1受体活化可促进D1受体的脱敏,该作用能被A1受体特异性拮抗剂DPCPX所阻断,然而,CPA对D1受体脱敏的促进作用并不能被Gi蛋白特异性抑制剂PTX所阻断,这表明A1受体活化后对D1受体脱敏的影响并不是通过激活Gi蛋白产生的。此外,用腺苷脱氨酶或DPCPX预处理共表达细胞,可减弱D1受体的脱敏现象。
以上结果表明A1受体对D1受体不仅存在短暂的拮抗作用,而且还存在长时程的拮抗作用。D1受体是精神分裂症,帕金森病等神经系统疾病的一个重要治疗靶标。治疗帕金森病主要采用L-DOPA或者多巴胺受体激动剂,但是长期连续大量应用这些药物会引起多巴胺受体的脱敏,导致受体内吞甚至受体下调,从而减退疗效,造成药物耐受。A1受体活化可促进D1受体脱敏这一实验结果为解决药物耐受,提高药物疗效提供了新的方向。
此外,本文作者还构建了多个多巴胺D1受体突变体,对D1受体第五、第六跨膜区、第三胞内环以及C末端各个结构域与腺苷A1受体的作用位点进行研究,期望找到A1/D1异源二聚体形成的受体结构区域。