牛血清蛋白分子生物整体柱的制备及当归提取液的分离分析

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整体柱是近年发展起来的一种新型色谱柱,与传统的填充柱相比,它具有渗透性好、制备简单,能实现快速、高选择性分离等优点。本论文采用甲基丙烯酸缩水甘油酯(Glycidyl methacrylate,GMA)为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(Ethylene dimethacrylate,EDMA)为交联剂,偶氮二异丁腈(Azobisisobutyronitrile,AIBN)为引发剂,以正丙醇、1,4-丁二醇和水的混合物为致孔剂,将这些混合物在液相色谱空管柱中通过热引发“原位”(in-situ)聚合来制备整体柱基质。然后将牛血清蛋白(Bovine serum albumin,BSA)固载到基质上,得到牛血清蛋白分子生物整体柱,用该整体柱对当归的提取液进行了分离分析。 本论文通过对总单体(GMA和EDMA)和总致孔剂比例及总致孔剂中各成分比例的调节,优化了制备整体柱基质的条件,获得较为理想的配比:30%总单体(GMA 75%,EDMA 25%),70%致孔剂(正丙醇75%、1,4-丁二醇15%、水10%),总单体中加入1mg/ml的AIBN。在此基础上,比较了不含间隔臂键合蛋白、含己二胺间隔臂键合蛋白以及吸附蛋白三种固载蛋白的方法,最终选择吸附法固载蛋白。 用上述条件制得的牛血清蛋白分子生物整体柱,考察了HPLC条件(流动相中甲醇含量、流速、缓冲溶液浓度、pH值、柱温等)对当
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