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禽流感(Avian Influenza,AI)是由正粘病毒科、正粘病毒属A型禽流感病毒所引起的禽的烈性传染病;最早于1878年在意大利发现,此后在多个国家和地区陆续被报道。H9N2亚型禽流感病毒属于低致病性禽流感病毒,在我国一经发生后迅速大范围扩散。虽然该病毒致病力较低,但是能引起家禽的呼吸道症状以及产蛋家禽明显的产蛋下降,给我国家禽养殖业带来巨大的经济损失。H9N2禽流感病毒主要通过饲料、饮水、空气、用具等以直接或间接接触方式发生水平传播,但在生产中我们发现,感染H9N2禽流感病毒的种禽产蛋下降,种蛋的孵化率下降,死胚增加,出壳后的雏禽前期死亡率较高。我们推测导致这一现象的原因是H9N2流感病毒能通过种禽、种蛋、胚胎垂直感染,在孵化过程中,种蛋中的病毒大量增殖,而引起胚胎带毒或死亡,出壳后雏禽由于带毒而出现前期死亡。为确认H9N2流感病毒能否发生垂直感染,本试验进行了种鹅垂直传播及其致病性研究,以期为该病的防治提供流行病学依据。1自然感染病例种蛋、禽胚和雏禽中H9N2禽流感病毒的检测2014年到2015年间,从我国部分地区发病禽场收集种蛋、禽胚、雏禽发病样品,无菌收取卵黄膜和肺脏或脑组织样品进行病毒检测。种蛋检测阳性率为33.3%(22/66)数量,胚体检测阳性率为27%(28/103),雏禽检测阳性率为43%(103/241)。2 H9N2亚型AIV人工感染动物模型的建立将360日龄的泰州种鹅分为A、B、C、D 4组,每组有18只母鹅和3只公鹅。A、B、C各实验组分别通过静脉、点眼滴鼻和喉接种途径接种H9N2禽流感病毒液2.8m L/只(ELD50=10-7.5/0.2 m L),各组分别隔离饲养。收集A、B、C、D四组的种蛋,分别进行孵化,记录孵化和受精情况。无菌收集卵黄膜和胚体的肺脏或脑组织样本,检测H9N2禽流感病毒,同时对收集的各组织进行常规处理后,接种SPF鸡胚进行病毒的分离,RT-PCR检测流感病毒。结果有的鹅胚颈部水肿、出血。死亡胚体剖检可见胚体出血、卵黄吸收不良、卵黄稀薄、肝脏有出血淤血。病毒检测结果显示:静脉组、点眼滴鼻组和喉途径接种试验组的卵黄膜和胚体的H9N2禽流感病毒检出率分别为80%(4/5)和43%(3/7)、25%(1/4)和44%(4/9)、33%(1/3)和42%(3/7);对照组的种蛋孵化过程中也有死亡,但是未检测到H9N2亚型AIV。将新分离病毒扩增HA基因并测序,结果与原毒株的核酸同源性在99.0%~100%,表明H9N2病毒可以通过感染的种鹅经过鹅胚传给下一代,即H9N2在种鹅中可以垂直传播。3 H9N2禽流感病毒对种鹅的致病性研究种鹅接种H9N2禽流感病毒后,每隔3d采集三只种鹅血清,利用血凝血抑试验检测种鹅血清的H9N2禽流感抗体水平,利用细胞因子检测试剂盒检测IFN-γ和IL-4水平;采集的泄殖腔棉拭子采用RT-PCR方法检测种鹅排毒情况。每隔3d定时剖杀种鹅,无菌采集肝脏、脑、肺脏、脾脏、气管、卵黄膜和输卵管等器官进行病理组织学研究。结果显示:攻毒后沙壳蛋增多,种鹅排稀便,精神沉郁,偶有轻微呼吸道症状。H9N2流感病毒抗体水平检测结果表明:静脉注射组上升最快且维持时间长,喉途径接种组抗体水平上升最慢,点眼滴鼻组的抗体水平最晚达到最高峰,对照组抗体水平为阴性。细胞因子检测结果显示:IL-4和IFN-γ表达水平在1dpi达到最高峰,一直呈下将趋势,说明病毒感染后影响机体的免疫系统。排毒规律检测结果显示:静脉组、点眼滴鼻组和喉接种组分别在4dpi、6dpi、8dpi开始检测到病毒,一直持续到试验结束。剖检研究结果显示:种鹅接种H9N2流感病毒后,肺脏淤血出血,变化明显;卵巢、输卵管和睾丸萎缩;脾脏出血,肝脏淤血出血,胰脏出现坏死灶等。病理组织学研究结果显示:肺脏和卵巢病变严重。试验结果表明:H9N2流感病毒接种种鹅后,对肺脏和卵巢影响严重,影响禽的呼吸和产蛋;种鹅可通过泄殖腔长时间排毒,有利于病毒的传播。