蛋白激酶Ca相互作用蛋白（protein interacting with Cαkinase1，PICK1）是蛋白激酶Cα（protein kinase Cα，PKCα）的靶蛋白之一，是衔接PKCα和膜上众多受体的关键蛋白，在人和动物的细胞或组织内均可表达。小鼠来源的PICK1由416氨基酸残基组成，其N-末端含有PDZ（（?）SD95 （?）iscs large and （?）ol）结构域，C-末端含有一个BAR（Bin／amphiphysin／RVS）结构域，靠近C-末端含有一个酸性氨基酸区。α-SNAP蛋白（Soluble NSF Attachment Proteins）是膜泡转运中开启NSF的ATP水解酶活性的重要调节蛋白之一。在PICK1调节突触后膜上AMPA受体的胞吞作用引起LTD的过程中，α-SNAP协助参与不同阶段蛋白复合体的形成，但目前对PICK1蛋白和α-SNAP蛋白相互作用研究的报道比较少。本文对PICK1蛋白进行了基因克隆，重组蛋白的大量表达和纯化，并对其溶液中分子状态、钙离子结合性质，以及与α-SNAP蛋白之间的相互作用进行了初步研究。根据报道的PICK1序列，设计PCR引物，以重组质粒pRK5-pick1为模板，经PCR扩增获得PICK1基因，分别克隆到pET32M和pGEX-6p-1载体中，并在E．coliBL21中进行表达。重组子pET-pick1表达产物为包涵体，而重组子pG-pick1表达产物为可溶性融合蛋白GST-PICK1，可溶性产物占细胞总蛋白的20％，经GST-Sepharose 4B亲和层析和PreScission Protease（PPase）酶切，以及Sephacryl S-200凝胶层析获得了电泳纯的PICK1蛋白，经SDS-PAGE分析，其单体分子量约为50kDa。天然聚丙烯酰胺凝胶电泳和分子排阻层析结果表明，PICK1蛋白在溶液中主要以二聚体形式存在，分子量约为100 kDa。我们用荧光实验初步分析了PICK1蛋白与钙离子的结合特性，发现随着Ca²⁺浓度的增加，PICK1的内源荧光强度逐渐下降，经计算每个PICK1蛋白中可结合2个Ca²⁺，结合常数为1.84x10⁸ mol^-1·L。将α-SNAP基因及突变体α-SNAP₁₁₅，α-SNAP_116-295基因克隆到表达载体pE32M中，并在E．coli BL21中进行表达，目的蛋白以可溶形式存在，表达量可达到细胞总蛋白的20％-30％。经Ni²⁺-NTA agrose亲和层析和Sephacryl S-200凝胶层析获得电泳纯的目的蛋白。利用亲和层析法对α-SNAP蛋白和PICK1蛋白及其PDZ结构域，BAR结构域的相互作用进行比较，初步推测α-SNAP蛋白可能主要与PDZ结构域结合。在此基础上，用FITC标记α-SNAP蛋白，研究PICK1蛋白与α-SNAP不同截短型之间的相互作用，进一步证实PICK1蛋白与α-SNAP蛋白的相互作用区域可能主要位于PICK1蛋白的N-末端PDZ结构域和α-SNAP的C-末端含116-295氨基酸残基部分。并求得PICK1蛋白与α-SNAP₂₉₅的结合常数为4.5x10⁵ mol^-1·L，而PDZ蛋白与α-SNAP₂₉₅和α-SNAP_116-295的结合常数分别为3.0x10⁵ mol^-1·L和2.9x10⁵ mol^-1·L。