雌性哺乳动物中,仅有极少数卵泡发育成熟并排卵,绝大部分卵泡(70%-99%)在发育过程中退化,最终被机体清除,这一过程称之为卵泡闭锁。卵泡发育的各个阶段均可能发生闭锁,这是一个正常的生理过程,但却是绝大部分卵泡命运的终点。长期以来,人们对卵泡闭锁展开了大量研究工作,但迄今为止,调控卵泡闭锁确切的分子机制尚未阐明,仍然需要进一步的研究和探索。阐明这一生理过程的分子机理对于丰富繁殖理论、提高动物繁殖力、促进胚胎工程发展、治疗人类生育类疾病具有十分重要的意义。近年来研究发现,一个称之为miRNA(即microRNA)的小RNA家族广泛参与了有机体的各项生命活动,如胚胎发育、物质代谢、信号转导、肿瘤发生、细胞增殖、分化、凋亡等。miRNA正以其种类多样、功能广泛的特点受到越来越多研究者的关注,成为目前研究的热点之一。本论文选取猪为试验动物,主要进行了以下几方面的研究：(1)观察猪卵泡闭锁的特征,分析表观观察、卵泡液颗粒细胞密度、卵泡液P/E比值三指标在判断卵泡闭锁程度上的关系；(2)检测3～5mm中等大小卵泡闭锁过程中的凋亡通路,对重要凋亡通路配体基因的表达调控进行初步探索；(3)建立卵泡闭锁过程中miRNA表达谱,筛选卵泡闭锁过程中,尤其在闭锁启动过程中差异表达的miRNA,并对差异表达的miRNA进行靶基因及功能分析；(4)从差异表达的miRNA中选取miR-26b,进一步验证miR-26b促进猪颗粒细胞凋亡,探究miR-26b促进颗粒细胞凋亡的分子机制。通过以上研究,为进一步阐明卵泡闭锁的分子机理,尤其是]miRNA对卵泡闭锁的调控提供理论基础。综合本论文的研究结果,主要得出以下结论：(1)卵泡闭锁的特征与判断方法猪卵泡闭锁的本质是颗粒细胞的凋亡,猪卵泡闭锁过程中近腔颗粒细胞先发生凋亡,逐渐向基膜发展。凋亡的颗粒细胞大量脱落进入卵泡液,导致卵泡液颗粒细胞密度剧增。同时,卵泡闭锁过程中卵泡液内P/E比值显著升高。根据实验结果分析,健康卵泡、早期闭锁卵泡、晚期闭锁卵泡的颗粒细胞密度分别为<10、10～30、>30；P/E比值分别为<5、5-10、>l0。三个指标在总体上对卵泡闭锁程度的判断趋于一致,建议采用其中两个指标确定卵泡闭锁程度。(2)猪3-5mm卵泡闭锁的凋亡通路猪3-5mm卵泡闭锁主要通过TRAIL和Fas L途径。aspase-8在凋亡信号的传递过程中起重要中间体的作用,凋亡信号从胞外转入胞内后通过Caspase-8进一步诱导凋亡。抗凋亡基因XIAP在这3-5mm卵泡颗粒细胞的抗凋亡过程中其重要作用。转录因子Fox O1可能参与调控凋亡通路配体基因的表达。(3)猪卵泡闭锁过程中miRNA的表达在猪卵泡闭锁过程中检测了1251个成熟miRNA的表达,其中329、369、435种miRNA分别表达在健康卵泡、早期闭锁卵泡、晚期闭锁卵泡中。发现了在卵泡闭锁过程中差异表达的miRNA近200种,我们特别关注了在卵泡闭锁启动阶段差异表达的23种miRNA,对它们进行了靶基因及功能、通路分析后发现,let-7a、miR-26b等miRNA可能在细胞凋亡通路中起调控作用。(4) miR-26b调控猪颗粒细胞凋亡的机制研究发现]miR-26b在卵泡闭锁过程中表达上调,miR-26b能在体外诱导猪颗粒细胞的凋亡,并证明在猪颗粒细胞中,ATM是miR-26b的直接靶基因,miR-26b过表达的颗粒细胞中DNA损伤显著增加,从而推测：miR-26b通过靶向ATM基因,影响DNA损伤的修复,增加DNA损伤,从而促进颗粒细胞的凋亡。本论文研究了猪卵泡闭锁的生理生化特征,确定了猪3～5mm卵泡闭锁过程中细胞凋亡的通路,发现了300～500个表达于猪卵泡的miRNA,筛选出近200种在卵泡闭锁过程中差异表达的miRNA,阐明了miR-26b促进颗粒细胞凋亡的分子机制。miRNA在卵泡闭锁过程中的作用的相关研究是对miRNA功能的拓展,同时也有助于卵泡闭锁分子调控机理的阐明,是将表观遗传学理论应用于动物繁殖学研究的一次初步尝试。