短花针茅StbCRY1和StbCRY2基因的克隆与表达差异的初步分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liyang0ly
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短花针茅(Stipa breviflora)是荒漠草原的优势物种,兼具优秀的饲用价值和稳固水土的重要作用,其生殖生长受外界环境的影响较大。有研究表明,蓝光受体隐花色素CRY1(cryptochromes1)、CRY2(cryptochromes2)可以通过调控多条信号转导途径,调节植物光形态建成,从而影响植物生长发育及开花时间等过程。探究野外短花针茅生长发育过程中的CRY1、CRY2对不同环境条件的响应关系,对进一步研究蓝光受体隐花色素在短花针茅花发育中的调控机制具有重要的意义,将为草原生态系统的管理和可持续利用方面提供有用的信息。本研究基于长期增温施氮处理下短花针茅转录组差异表达转录本序列信息,以其中表达具有显著差异的StbCRY1、StbCRY2基因的部分片段为基础,对其进行克隆及表达分析。结果如下:(1)通过5’RACE获得短花针茅StbCRY1和StbCRY2基因c DNA序列2987bp和2996bp,其中包括完整的ORF框,分别为2102bp和1962bp,编码699和653个氨基酸。(2)构建了GFP融合表达载体pBWA(V)HS-CRY1-GLosgfp和p BWA(V)HSCRY2-GLosgfp,亚细胞定位显示短花针茅CRY1和CRY2蛋白主要定位于细胞核,其中,CRY1有少量可能定位于细胞质。(3)在放牧处理下,短花针茅生殖枝StbCRY1、StbCRY2表达水平受到开花程度影响,在开花前期表达量较高,随开花进程向授粉期推进,表达量下调;营养枝叶片StbCRY1、StbCRY2基因表达量随生殖生长过程的推进降低,开花前期在轻度放牧处理响应最为显著,开花中期与开花后期表达量受重度放牧影响呈现上调趋势。在增温施氮处理下,短花针茅生殖枝两种基因开花时期表达水平受增温(W)和施氮处理的影响较大,增温施氮交互作用下开花时期影响尤为明显,开花中期表达量下调最为显著;营养枝叶片中StbCRY1和StbCRY2主要对W处理有较明显的响应,不同开花时期表达量都与对照组表达量存在显著差异。
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