氯过氧化物酶(CPO)是一种应用非常广泛的亚铁血红素过氧化物酶，具有很高的异构体选择性和普遍性。主要以氯化物、溴化物和碘化物作为专一性的底物，在有合适的受体存在时就可以催化生成碳卤键。近年来，随着氯过氧化物酶在工业、农业和医学方面应用研究的进展，氯过氧化物酶的需求量也日益增加。但是目前国内尚无任何发酵生产的报道。 本文采用购自英国的一株海洋丝状真菌Leptoxyphium fumago，通过对该菌的形态特征、生理生化特性及抗菌性等生物学特性进行研究，了解其最适生长条件，并以此为基础，研究实验室条件下Leptoxyphium fumago生产氯过氧化物酶最优化的培养基组成、最适的环境条件和最优化的发酵条件，并且研究对发酵液中发酵产物CPO进行分离纯化的方法。 通过对丝状真菌Leptoxyphium fumago生物学特性的研究发现，该菌株能够利用多种碳源和氮源等营养物质进行生长。其生长条件为中性偏酸性，在培养过程中发现除枯草芽孢杆菌以外，该菌不易被污染，有良好的抗菌性。为优化Leptoxyphium fumago的复合发酵条件，选择碳源、氮源和天然物提取液及环境条件等为自变量，采用二次响应曲面通用旋转组合设计方法，研究各自变量及其交互作用对CPO产量的影响，利用Minitab软件和响应面分析相结合的方法，模拟得到二次多项式回归方程的预测模型，并确定最佳发酵条件为：葡萄糖18.488g/L，蔗糖15g/L，淀粉10g/L，NaNO32g/L，酵母粉7g/L，马铃薯浸出液1000 mL/L，KCl3.25g/L，KH2PO42.55g/L，MgSO4·7H2O2.39 g/L，FeSO4·7H2O0.22 g/L，pH7.0，温度为25℃，接种量为2c㎡菌苔/瓶，发酵液装液量为50mL/250mL三角瓶。在此条件下，酶活力预测值可以达到770.244IU/mL。经实际验证得到的酶活力为755.366 IU/mL，相对误差不到1％。 经研究得到的分离纯化方案为：发酵液固液分离去除菌体后制备粗酶液→超滤→硫酸铵盐析→DEAE—纤维素53离子交换层析→Sephadex G-100凝胶层析。采用该纯化方案，CPO比活达到6146.24U/mL，比初始发酵液酶活提高了17.01倍。对CPO的酶学性质进行研究发现，该酶在室温下的Km值为12μmol/(L·min)；CPO的最适反应pH为2.75，最适反应温度为25℃，且实验发现酶反应速率受反应温度影响较大。