内蒙古鄂尔多斯地区传统乳制品中乳酸菌的分离鉴定及优势菌群的定量分析

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本研究从内蒙古鄂尔多斯市乌审旗、鄂托克旗和杭锦旗3个旗县9个地区的牧民家庭采集了48份传统乳制品样品,应用纯培养方法和16S rRNA基因序列分析法对乳制品中的乳酸菌进行分离鉴定,并利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术对酸牛乳、酸绵羊乳和酸山羊乳中优势菌种的数量进行分析,为保护和丰富内蒙古地区传统乳制品中的乳酸菌资源提供帮助。应用稀释平板计数法检测样品中乳酸菌活菌数。经检测,48份样品中的45份活菌数在71g CFU/m L以上,另外3份也在6lg CFU/mL以上,乳酸菌活菌数的范围在5.78-9.84 lg CFU/mL之间。利用乳酸菌分离培养基MRS和M17培养基对样品中乳酸菌进行分离纯化,通过表型特征法初步筛选乳酸菌,获得189株乳酸菌。运用16S rRNA基因序列分析法对乳酸菌进行种属水平上的鉴定,鉴定结果显示,分离出的189乳酸菌分别为6个属,19个种或亚种。其中包括乳杆菌属(Lactobacillus)的7个种和魏斯氏菌属(Weissella)的2个种,具体为Lactobacillus brevis(1株)Lanctobacillus helveticus (89株)、Lactobacillus kefiranofaciens(1株)、Lactobacillus kefiri(2株)、Lactobacillus paracasei(2株)、Lactobacillus. plantarum(17株) Lanctobacillus helveticus (1株)、Weissella cibaria(1株)、Weissella koreensis(1株);链球菌属(Streptococcus)的1个种、乳球菌属(Lactococcus)的1个种、明串珠菌属(Leuconostoc)的2个种及亚种、肠球菌属(Enterococcus)的3个种,具体包括Enterococcus durans(9株)、Enterococcus faecalis(5株)、Enterococcus faecalis(2 株)、Leuconostoc mesenteroides1(9株)、Leuconostoc pseudomesenteroides(6株)、 Streptococcus thermophilus(2株)、Lactococcus lactis subsp.lactis(31株)鄂尔多斯地区优势菌种为:L.helveticus,占分离株的47%;Lac.lactis subsp.lactis(31株),占分离株的16%;Leu.mesenteroides占分离株的10%;L.plantarum占分离株的9%;这4者共占分离株的82%,其余种属的分离株数目较少。运用qPCR研究鄂尔多斯地区酸牛乳、酸绵羊乳和酸山羊乳中4种乳酸优势菌种的数量,结果表明3种发酵乳中的不同菌种基因拷贝数在106-1011 copise/g fece,L. helveticus、L.plantarum和Lac.lactis subsp.lactis的数量关系在酸牛奶、酸绵羊奶、酸山羊奶内并无显著性差异,对于Leu.mesenteroides,酸山羊奶中的数量显著高于酸绵羊奶和酸牛奶,酸牛奶中的数量显著高于酸绵羊奶。这与3种发酵乳中乳酸菌的分离鉴定结果相一致。
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