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目的:
评价采用腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统(Ad-VEGFp-CDglyTK)混合超液态碘油,经肝动脉靶向性栓塞,术后腹腔注射更昔洛韦(GCV)+5-氟胞嘧啶(5-FC),综合治疗兔VX2肝移植癌的效果。
材料与方法:
第一部分:腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统的构建:采用pAdEsayVEGFp-CDglyTK重组质粒转染293细胞,进行包装、扩增;采用标准的氯化铯密度梯度离心法纯化;采用空斑试验测定滴度;通过荧光显微镜观察293细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达观察重组病毒的包装与复制;采用DNA抽提、PCR、琼脂糖凝胶电泳法鉴定。
第二部分:兔VX2肝移植癌模型的建立:雄性新西兰大白兔,40只,采用开腹直视下组织块种植法,将VX2瘤株接种于兔肝左叶内,建立兔VX2肝移植癌动物模型;应用MRI、SCT、DSA、US等影像学手段监测。
第三部分:靶向性腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统混合超液态碘油综合治疗兔VX2肝移植癌的实施与综合评价:当肿瘤达2.0cm直径时,将荷瘤兔随机分为NS组(仅注射生理盐水,对照), LP组(仅注射超液态碘油),Ad-VEGFp-CDglyTK组(注射Ad-VEGFp-CDglyTK)及Ad-VEGFp-CDglyTK+LP组(注射Ad-VEGFp-CDglyTK与超液态碘油)。利用微导管经肝动脉介入,将生理盐水;超液态碘油;Ad-VEGFp-CDglyTK;Ad-VEGFp-CDglyTK与超液态碘油分别给予不同组。
结论:
1.本实验成功地构建了腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统(Ad-VEGFp-CDglyTK)。重组腺病毒的滴度达1×10<'12>pfu/ml。PCR检测发现腺病毒内有CD/TK双自杀基因DNA水平的表达。
2.本实验成功地建立兔VX2肝移植癌动物模型。该模型具有接种方法简单、成瘤率高、重复性好、模型性质稳定的特点,是可供介入实验的肝癌动物模型。
3.本实验成功地实施了靶向性腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统混合超液态碘油综合治疗兔VX2肝移植癌。经肝动脉介导方式,是Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液态碘油治疗兔VX2肝移植癌理想的给药方法及途径。
4.RT-PCR检测发现兔VX2肝移植癌动物肿瘤组织内有CD/TK双自杀基因mRNA水平的表达。
5.综合应用MRI、SCI、、DSA、US等影像学手段,可满意观察到肿瘤,其优点:①早期发现肿瘤形成;②动态观察肿瘤生长及转移情况等。综合影像评价有利于实验动物的筛选。
6.Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液态碘油,经肝动脉靶向性栓塞,术后腹腔注射GCV+5-FC,对兔VX2肝移植癌有确切的杀伤作用。该综合治疗体系具有满意的体内抑瘤效应,表现为肿瘤的生长抑制、瘤体微血管密度的减少、肿瘤组织坏死及肿瘤细胞凋亡的增加等。
7.该综合治疗体系与单纯超液态碘油栓塞疗法以及单纯灌注Ad-VEGFp-CDglyTK、术后腹腔注射GCV+5-FC疗法相比较,对兔VX2肝移植癌有增强治疗效果的作用。
8.该综合治疗体系对兔VX2肝移植癌的治疗具有比较安全的优点。治疗后,荷瘤兔心、脑、肾、脾等器官无明显组织学变化,提示对荷瘤兔无明显系统毒副作用。
9.该综合治疗体系有望成为治疗人类肝癌一种新型、可行而有效的方法。