论文部分内容阅读
牙周组织包括牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质,其改建是正畸牙移动(orthodontic tooth movement,OTM)的生物学基础。很多研究证实,中药可以影响正畸牙移动进程,柚皮苷(Naringin)作为中药骨碎补的重要成分之一,大多来源于芸香科柑橘属植物的干燥果皮中,能够增强牙周膜细胞的增殖和成骨向分化能力。Hedgehog信号通路与骨的生长发育密切相关,Runx2在Hedgehog促进成骨细胞晚期分化过程中发挥重要作用,而柚皮苷可增强Runx2在体外培养的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)中的表达水平,因而我们推测,柚皮苷可以通过Hedgehog信号通路来促进正畸牙移动。目的:本研究将探讨柚皮苷是否可通过Hedgehog信号通路来促进牙周膜干细胞的成骨分化。方法:运用组织块培养法孵育原代人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs),取生长状态良好的第三代细胞行流式细胞术鉴定细胞干性;行成骨诱导分化实验和成脂诱导分化实验证实培养的细胞具有分化潜能;运用ALP定量法研究柚皮苷浓度与时间对牙周膜干细胞成骨分化的影响,从而确定最佳药物浓度与药物作用时间;将实验组分为柚皮苷组、柚皮苷+通道抑制剂组及空白对照组,运用RT-PCR和Western Blot对比各分组ALP、OCN、Runx2等成骨相关及SMO、Gli1、Ptch通道相关基因蛋白的表达量。结果:1.成功运用组织块培养法得到hPDLSCs,形态正常呈梭形或多角形,状态良好,流式细胞术显示其表面标记物CD44、CD90、CD105表达呈阳性,CD34、CD45表达呈阴性;成骨诱导茜素红染色阳性,有矿化结节形成;成脂诱导油红O染色阳性,有脂滴形成,说明细胞具有分化潜能。2.ALP定量法显示,柚皮苷作用7天,浓度为1mg/L为最佳药物作用时间及浓度。3.加入通道抑制剂cyclopamine后,成骨相关及通道相关基因及蛋白表达量降低,证明柚皮苷可通过Hedgehog信号通路促进hPDLSCs成骨分化,抑制Hedgehog信号通路可降低柚皮苷的促成骨作用。结论:1.柚皮苷对hPDLSCs的成骨分化有促进作用,ALP试验结果探索出最佳浓度与作用时间的关系。2.Hedgehog信号通路在hPDLSCs成骨分化中起调控作用。3.柚皮苷可通过Hedgehog信号通路促进hPDLSCs成骨分化。