【摘 要】
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单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因是肿瘤基因治疗研究中常用的自杀基因,为达到安全有效的治疗目的,需要调控HSV-tk基因在肿瘤细胞内精确地表达,从而防止基因过表达对机体产
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单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因是肿瘤基因治疗研究中常用的自杀基因,为达到安全有效的治疗目的,需要调控HSV-tk基因在肿瘤细胞内精确地表达,从而防止基因过表达对机体产生危害,低表达影响治疗效果。本研究利用基因重组技术构建了四环素调控HSV-tk基因表达的双质粒载体系统,在此基础之上又构建了四环素调控HSV-tk基因表达的单质粒载体系统。体外细胞水平研究结果表明构建的四环素调控HSV-tk的双载体系统可有效调控HSV-tk基因在宫颈癌HeLa细胞表达及抗肿瘤活性;构建的四环素调控HSV-tk的单载体系统可有效地调控HSV-tk基因在HeLa细胞及结肠癌HCT-8细胞内表达,并可调控其抗肿瘤活性.本研究构建的四环素单质粒基因表达调控系统与四环素双质粒基因表达调控系统比较,具有基因转染操作简便、节省时间和经济成本等优点;同时单质粒调控系统是一个自我调节基因表达的调控载体,能使HSV-tk基因有一定的基础表达,比双载体系统启动基因表达所需时间短、强力霉素所需浓度低,以及调控基因表达时间长。这些特点使其更适用于肿瘤的基因治疗。本研究成功构建了四环素调控HSV-tk基因表达的双载体系统及单载体系统,为进一步提高HSV-tk基因肿瘤治疗的安全性及有效性奠定了实验基础。
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