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胰腺导管内乳头状粘液性肿瘤(IPMN)是胰腺癌最重要及最常见的癌前病变之一,WHO将其分为IPMN伴轻度不典型增生、IPMN伴中度不典型增生、IPMN伴重度不典型增生及IPMN相关浸润性癌；该分类决定着患者的治疗方案和预后。根据肿瘤细胞内粘液,又分为胃型、肠型、胰胆管型和嗜酸细胞型。目前仅凭借基本的HE形态,有些病例诊断及鉴别诊断困难很大,并且重复性较差。本研究筛选出我院2000-2009年61例IPMN,调阅所有石蜡包埋的切片,从病案室查阅病例,补充临床资料；电话和门诊随诊病历查询患者的预后情况,应用1.免疫组化技术检测MUC1, MUC2, MUC5AC, β-catenin, E-cadherin的蛋白表达情况及Ki-67增殖系数；2.应用RT-PCR方法检测KRAS基因突变,评估不同分类IPMN之间的差异；3.PCR及PCR产物直接测序的方法检测CTNNB1的基因突变；4.核酸锁定原位杂交检测hsa-mir-96和hsa-mir-217的表达情况,分析其与肿瘤发展的关系；5.用统计学方法分析结果。以期从DNA、micro-RNA和蛋白水平了解IPMN各级病变的差异,探讨IPMN进展到浸润性癌的可能相关因素。结果：1.临床病理结果显示IPMN有33例发生在胰头部,14例发生在胰体尾部,14例全胰均见导管内病变；平均发病年龄为61.8岁。37例首发症状为腹部不适,14例为查体发现。61例影像学均发现胰管扩张或胰腺囊实性肿物。大体上,32例为多房囊肿,囊内含粘液并见乳头状肿物,胰腺导管扩张,13例为实性结节。胃型16例(26%),肠型21例(34%),胰胆管型21例(34%),嗜酸细胞型3例(5%)；IPMA13例(21%),IPMB12例(20%),IPMC7例(11%),IPMC-Ⅰ29例(48%)。29例IPMC-Ⅰ有导管腺癌23例(79%),胶样癌4例(14%),分化不良癌和筛状癌各1例(3%)。12例浸润深度≤0.5cm,15例浸润深度≥1cm；16例浸润癌局限在胰腺范围内,13侵犯胰腺周围脂肪组织,6例有淋巴结转移。性别、年龄>65岁、发生在胰头部、有慢性胰腺炎病史、肿瘤直径>3cm均与浸润无关,肿瘤直径>5cm,P=O.024(0.05,具有统计学意义,提示肿瘤直径>5cm与IPMN发展到浸润性癌有关联。年龄>65岁、发生在胰头部、有慢性胰腺炎病史、肿瘤直径>3cm、肿瘤直径>5cm,与肿瘤良恶性无关,仅与性别有关系,女性患者发生恶性IPMN的可能性更大。2.免疫组化结果显示57例做了免疫组化,MUC5AC、E-cadherin、β-catenin的阳性率分别为89%、91%和100%。MUC1总阳性率为30%(17/57),胰胆管型阳性率为74%(14/19),其他类型仅3例阳性；IPMC-Ⅰ阳性率为65%(17/26),非浸润性IPMN阳性率为0；均有统计学意义。浸润性癌的MUC1阳性强度高于同一例标本内的导管内成分。MUC2总阳性率为35%(20/57),肠型阳性率95%(18/19),非肠型IPMN仅有1例阳性,二者之间有统计学意义；非浸润性及浸润性IPMN的阳性率分别为39%(12/31)和31%(8/26),二者之间无统计学意义。β-catenin导管内成分的阳性强度高于浸润性癌的强度,尤其是分化不良的癌,阳性强度较弱。Ki-67增值系数在IPMA中较一致,除1例为8%外,均在5%以下；IPMB、IPMC及IPMC-Ⅰ的增殖系数不等。3.基因突变检测结果显示KRAS共检测到32个基因突变,分布在28例标本上,突变率为50%。突变位点包括35G>A13个,35G>T12个,34G>A3个,35G>C1个,34G>T2个,34G>C1个；4例有两处突变,35G>T/34G>A有2例,34G>A/35G>A和35G>A/35G>T各有一例,这4例标本中仅有1例是良性腺瘤,其余3例均为浸润性癌。各粘液分型的阳性率分别为胃型60%(9/15),肠型53%(10/19),胰胆管型47%(9/19),嗜酸细胞型0(0/3)；各分类的阳性率分别为IPMA58%(7/12), IPMB27%(3/11), IPMC57%(4/7), IPMC-154%(14/26)。阳性率统计学显示KRAS基因突变与IPMN的粘液类型,细胞异型性程度,是否有浸润均无关系；与浸润性癌的浸润范围、浸润深度、分化程度、是否有淋巴结转移、浸润性癌的类型等均无关系。CTNNB1检测到1个基因突变,突变率为2%(1/56),阳性率太低,不足以分析。4.核酸锁定原位杂交结果hsa-mir-96和hsa-mir-217在胰腺腺泡中高表达,在IPMN中的阴性率分别为54%和49%。Hsa-mir-96的LNA-ISH结果在各粘液分型的阴性率分别为胃型31%(5/16),肠型42%(8/19),胰胆管型89%(17/19),嗜酸细胞型33%(1/3)；hsa-mir-96在IPMA、IPMB、IPMC、IPMC-Ⅰ中的阴性率分别是31%(4/13)、36%(4/11)、57%(4/7)、73%(19/26)。Hsa-mir-217的LNA-ISH结果在各粘液分型的阴性率分别为胃型31%(5/16),肠型42%(8/19),胰胆管型74%(14/19),嗜酸细胞型33%(1/3)；hsa-mir-217在IPMA、IPMB、IPMC、IPMC-Ⅰ由的阴性率分别是23%(3/13)、36%(4/11)、71%(5/7)、62%(16/26)。在胰腺IPMN病变的早期hsa-mir-96和hsa-mir-217就出现了表达下调；并随着异型性的增加表达逐渐下调。统计学结果显示hsa-mir-96和hsa-mir-217在良性及恶性IPMN中的表达有明显差异,hsa-mir-217在浸润及非浸润IPMN中也有明显的表达差异。5.预后结果显示61例患者手术后随访,6例7-39个月后失访。38例患者手术后无病存活(no evidence of disease, NED),3例带病存活(alive with disease, AWD),14例死于该疾病(dead of disease, DOD),及死于其他原因(dead of other causes, DOC)。实际5年存活率76%,浸润性IPMC的3年存活率为55%,非浸润性IPMN的5年存活率为100%。浸润深度<0.5cm与浸润深度>5cm的生存期具有统计学意义。复发的4例中有2例二次手术,术后病理比较,未见明显差异,上皮细胞异型性无晋级。结果显示：1. IPMN是胰腺最常见的癌前病变之一,诊断时要明确分类和浸润程度。当IPMN大小超过5cm,优先考虑有浸润,必须手术治疗；女性更容易发生恶性IPMN。2.MUCl阳性提示胰胆管上皮分化,及浸润性癌的可能性大,与预后不好有关。MUC2是肠型分化的标记物,与浸润无关。肿瘤分化不良时β-catenin阳性表达下降,瘤细胞排列松散；Ki-67增殖系数对判断IPMN上皮的级别意义不大。3. KRAS基因突变率为50%,与病理分类及分型均无关,在IPMN早期病变即可有较高的基因突变率,与病变的进展无关。CTNNB1基因突变率低,在IPMN的发生及发展中作用很小,可能与嗜酸细胞型IPMN有关。4. hsa-mir-96和hsa-mir-217可能对肿瘤的发生起一定的作用；起到抑癌基因的作用；hsa-mir-217阴性表达提示IPMN更容易发生浸润,预后不良。5. IPMN的预后显示浸润决定着生存时间,IPMN相关浸润性癌的预后明显差于无浸润性IPMN.浸润深度≤0.5cm预后明显好于浸润深度>0.5cm。