多中心性尿路上皮癌克隆起源的X染色体失活类型研究

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目的:尿路上皮癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤,多中心性肿瘤具有高复发率、高进展率和高致死率的特点,目前尿路上皮肿瘤多中心发生的克隆机制尚未阐明。女性患者中x染色体失活类型具有高度的遗传稳定性,是目前分析肿瘤细胞克隆起源状态的最佳手段。本实验通过X-染色体的非随机性失活(X-chromosomenonrandom inactivity)分析,研究尿路上皮癌多中心发生的克隆起源。方法:收集10名女性尿路上皮癌以及对应的正常尿路上皮组织标本,共33例标本,分别提取DNA,经甲基化敏感性限制性核酸内切酶Hha I消化后,对人类雄激素受体(HUMARA)基因片段行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)并经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示单股DNA片段长度,观察电泳条带判断其克隆状态。结果:10例女性多中心灶尿路上皮癌共33个组织标本进行了X染色体失活类型的检测分析,其中8例来自新鲜组织,2例来自石蜡切片组织。HUMARA基因的杂合率(%)=信息性病例/全部病例得出90.9%(30/33)。多中心性尿路上皮肿瘤标本中,肿瘤标本之间失活类型相同,即单克隆起源为77.8%(7/9);二者之间失活类型不同,即多克隆起源占22.2%(2/9)。结论:多中心性尿路上皮癌中,多数各瘤灶间具有相同的X染色体失活类型(即共同克隆起源),提示其它病灶为原发灶的转移、扩散所致。少数具有与原发灶不同的X染色体失活类型(即多克隆起源),各瘤灶均为独立发生,此结论可扩大病例数量,为实验提供可靠依据。
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