固定化酶技术作为酶工程的重要内容越来越受到人们的关注。固定化酶易分离回收,可重复利用,相比于游离酶,具有成本低,稳定性高等优势。在复杂的工业生产上,大多数产物生产需要多酶联合使用来实现。本文研究了一种以多孔材料作为载体,共固定化葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化氢酶(CAT)的固定化酶,实现了催化氧化葡萄糖生产葡萄糖酸的工艺过程。研究内容主要包括多孔材料的制备及优化,载体材料表面修饰方案的优化,GOD和CAT共固定化过程的优化,以及共固定化酶的酶学性质研究。根据实验条件,以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体,通过悬浮聚合反应,制备甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)多孔材料。通过调节制备转速及致孔剂配方,获得一系列粒径和孔径的多孔载体,用于酶蛋白吸附和酶活测定。通过一系列表征手段分析得出,载体小球表面孔隙均匀,大小适中;载体平均粒径介于0.5～1 mm,平均孔径介于100～250 nm;当制备转速为500 rpm,油相和水相比例为1:1.5,致孔剂配方为甲苯/纳米碳酸钙时,固定化酶蛋白吸附量和相对酶活最高。通过对比四种载体表面修饰方式,包括乙二胺处理、等离子处理、先乙二胺后等离子处理、先等离子后乙二胺处理,对载体表面进行了氨基化修饰。并得出采用先等离子后乙二胺处理后载体固定化效果最好。通过单因素实验得出,等离子处理最适功率为80 w,时间为60 s,乙二胺最适浓度为1%。通过对比四种修饰方式的固定化酶,按先等离子后乙二胺处理方式得到的固定化酶固定化效果最优,表现为在储存5天后,固定化酶仍保持原始酶活的70%,在重复三次循环使用后,仍保持原始酶活的82%。采用共价交联的方式,将GOD和CAT共固定在修饰后的PGMA载体上,通过优化固定化条件得出,双酶酶活比为1:1.25,戊二醛浓度为1%,温度38℃,pH为7.0条件下,所获得的固定化酶固定化效率最高。采用扫描电镜和傅里叶红外光谱对固定化过程进行表征。电镜图片结果显示,固定化前后,载体表面粗糙程度明显变化;红外光谱结果显示,修饰处理后,载体表面官能团环氧基含量下降,氨基增多,双酶固定化后,载体表面酰胺键增多。对游离酶和固定化酶的酶学性质分析,固定化酶的最高酶活和蛋白吸附量分别为25.98 U/g和6.07 mg/g。通过动力学分析,固定化酶较游离酶有更强的底物亲和性。与游离酶相比,固定化酶拥有更广泛的最适温度25～40℃和pH 5.5～7.5。