背景脓毒症是由感染引起的全身炎症反应综合征(SIRS),主要表现为发热或体温下降、白细胞增多或减少、心动过速、呼吸急促等,其发病机制非常复杂,与机体多系统、多器官病理生理改变密切相关,成为影响患者预后、阻碍进一步提高救治的突出难题。欧美调查结果显示:全球每年发生重度脓毒症的病例超过1,800万,每天大概有1,4000人死于该症,且每年以1.5%的速率上升。目前认为,感染后机体炎症细胞的活化能产生多种促炎因子,这些因子又可导致更多炎症细胞的激活,两者互为因果,形成炎症级联反应(inflammatory cascade),这种级联反应逐级放大,最终全身播散,引起脓毒症。目前脓毒症主要治疗手段还只是依赖于支持疗法,如液体复苏,抗菌药物,机械通气和血液净化等,在占用大量医疗资源的情况下其病死率仍居高不下,因此,深入研究脓毒症发生机制,寻找新的治疗靶点和治疗方法,改善脓毒症病人预后,具有极为重要的意义。髓系细胞触发受体(TREM)-1是近期在髓系细胞激活和炎症反应过程中发现的分子,表达于中性粒细胞和成熟单核细胞、巨噬细胞上,在细菌和真菌感染的皮肤、体液和组织中可以发现TREM-1表达急剧增加,研究发现TREM-1和TLRs协同作用于炎症反应,进一步促进炎症因子的释放及正反馈促进TREM-1表达的上调,TREM-1能增强炎症因子释放,增强中性粒细胞致炎作用,且此作用受到NF-κB的调控。TREM-1和溶解形式sTREM-1在脓毒症过程中被上调,可作为脓毒症的生物学标志之一。TREM-1的天然配体有待于被发现,可能存在于脓毒症患者血小板上。利用mTREM-1/IgG1(一种鼠TREM-1胞外区和人IgG1 Fc段融合蛋白)封闭TREM-1功能可保护小鼠免遭LPS或者CLP诱发的脓毒症带来的损害。通过一种包含了CDR-3和TREM-1胞外区的‘F’β链(其中包含了可介导二聚体形成的酪氨酸残基)重叠区的17肽蛋白(LP17)来模拟TREM-1胞外区,可竞争TREM-1的天然配体与其结合从而调控其功能,在体外实验和体内动物实验均得到了证实。对TREM-1的调控可减少NF-κB的激活和细胞因子的生成从而保护小鼠免于过度炎症反应和死亡。通过基因敲除技术能使炎症细胞在LPS刺激后产生髓系分化蛋白88、白介素-1β、白介素-10和单核细胞趋化蛋白-1的能力下降。TREM-1作为介导SIRS的关键介质之一,由于TREM-1的这些特点,其发现被认为是近年来脓毒症发生机制研究中重要进展之一。在前期研究中利用感染患者TREM-1 mRNA表达增加的特点,从感染患者外周血单核细胞cDNA中分离出TREM-1基因,并构建表达载体。将TREM-1在体外表达和纯化,并以纯化的TREM-1为诱饵蛋白,在噬菌体随机12肽库筛选出能特异性和TREM-1受体结合并抑制其下游传导通路的多肽分子。目的研究TREM-1结合多肽对单核细胞炎症因子释放影响及脓毒症小鼠保护作用。方法1.采集健康者外周抗凝血,分离单个核细胞,经2h培养后得贴壁单核细胞,予LPS、血小板刺激24h,分别ELISA检测TREM-1结合多肽处理前后细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的浓度。2. 42只健康雄性Balb/c小鼠随机分为空白组;LPS组;对照1组(多肽);对照2组(LPS +TREM-1单抗);对照3组(LPS+多肽+TREM-1单抗);早期治疗组(LPS+LPS前1h多肽);延迟治疗组(LPS+LPS后4h多肽),各组分别于设定时间点取小鼠外周血,分离血清后ELISA检测其TNF-α、IL-1β水平,于肝组织提取mRNA行逆转录后荧光定量PCR检测TREM-1、TNF-α、IL-1βmRNA表达水平,并取肝、肺组织甲醛固定常规病理组织学观察。3. 50只健康雄性Balb/c小鼠随机分为空白组; CLP组;假手术组;早期治疗组( CLP后立即予结合多肽)、延迟治疗组( CLP后4小时予结合多肽),各组分别于设定时间点观察小鼠存活率及基本情况。结果1.加以血小板、LPS协同刺激后可见单核细胞培养上清中TNF-α、IL-1β较空白组显著增加,加以TREM-1结合多肽处理后,TNF-α、IL-1β较未处理组有所降低。2. LPS能增加小鼠肝细胞TREM-1mRNA表达,早期治疗组可抑制LPS引起的肝组织TNF-α、IL-1βmRNA表达增加及血清中TNF-α、IL-1β过度释放,且能减轻LPS导致的肝肺组织炎症反应,而延迟治疗组并未见以上抑制作用,此抑制作用均能为TREM-1单抗所拮抗。3. CLP组小鼠出现感染中毒症状,72小时存活率较空白组和Sham组显著降低,而早期给予TREM-1结合多肽治疗可见小鼠存活率明显提高,而延迟治疗组未见此保护作用。结论1.血小板与LPS协同作用能增加单核细胞TNF-α、IL-1β的释放。TREM-1结合多肽可抑制血小板、LPS刺激单核细胞TNF-α、IL-1β的过度释放。2. LPS诱导的脓毒症小鼠可见TREM-1mRNA表达水平上调。TREM-1结合多肽对脓毒症小鼠具有保护作用,阻断TREM-1介导的SIRS可能是其发挥作用的机制。3. TREM-1结合多肽对CLP诱导腹腔感染所致脓毒症小鼠具有保护作用,但延迟的治疗并不能提高脓毒症小鼠存活率。