副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis，HPS)病是影响养猪业的主要细菌性疾病之一，危害日渐严重，目前疫苗免疫是预防副猪嗜血杆菌病的主要措施，但HPS血清型众多，且不同血清型间不能提供有效的交叉免疫保护。omp5(outer-membrane protein P5，omp5)是该菌的主要黏附蛋白，与细菌的定植有关，是参与机体免疫应答反应的早期抗原。本研究的目的在于：探讨omp5基因是否存在于不同血清型及不同地区的HPS中，其同源性如何；omp5蛋白的抗原性如何，是否能与不同血清型的HPS抗体发生交叉反应，进而建立一种副猪嗜血杆菌病的快速检测方法，同时为研制HPS新型高效通用型疫苗以及研究HPS omp5基因的功能提供参考依据。　　 本研究对从广东地区和四川地区发病猪中分离到的不同血清型的30株HPSomp5基因进行克隆，对其序列同源性进行分析比较，并对其抗原位点进行预测分析，在此基础上，选择抗原位点最全面的片段构建表达载体；利用基因重组技术将omp5基因的PCR扩增产物与原核表达载体pET-32a(+)连接，转化入感受态细胞DH5α，通过PCR、双酶切及测序鉴定后，将阳性重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌，经IPTG诱导蛋白表达。亲和层析法纯化蛋白，尿素梯度透析复性之后，用Western blot方法对表达产物进行鉴定分析。纯化后蛋白分别按不同的浓度包被酶标板，与不同稀释倍数的高免血清反应，通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度，并对其他条件进行优化，最终建立副猪嗜血杆菌的间接ELISA检测方法。　　 结果表明，克隆的30株HPS菌的omp5全基因序列有3种长度，分别为1116bp、1104bp和1098bp，同源性及抗原性分析比较发现，不同血清型及不同地区的HPS omp5序列的同源性均大于88％，且蛋白保守性较强，抗原位点稳定。用大小为1116bp的omp5基因构建pET-OMP5原核表达载体，经大肠杆菌中诱导表达和亲和层析柱纯化，得到较纯的相对分子质量约为57kD的融合蛋白，Western blot结果显示，OMP5蛋白能与HPS抗体发生特异性结合。利用纯化复性后的omp5蛋白作为抗原，采用方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为1：400，血清的最佳稀释度为1：160，并对其他条件进行优化，最终建立副猪嗜血杆菌的间接ELISA检测方法。用建立的间接ELISA方法检测317份未进行HPS免疫的健康猪血清，结果检出72份阳性，检出率为22.71％，与广东地区发病猪中的HPS分离率24％接近。同时，用该方法与超声破碎抗原建立的ELISA方法同时检测了78份血清样品，结果，该法检出27份阳性，检出率为34.62％，后者则检出31份阳性，检出率为39.74％，二者符合率为71.79％。　　 本研究建立的间接ELISA方法特异性好、重复性好，检出率与广东地区发病猪中的HPS分离率接近，可为HPS的临床检测、流行病学调查及免疫监测提供一种可靠的技术手段，为OMP5蛋白作为一种诊断抗原应用于临床提供依据，同时为HPSomp5基因作为制备HPS新型疫苗的候选基因奠定了重要的理论基础。