论文部分内容阅读
调节性T细胞（RegulatoryTcells，Tregs）是一类具有免疫抑制功能的CD4+淋巴细胞亚群，在机体维持免疫耐受和免疫稳态中发挥着重要的作用。叉状头转录因子Foxp3是调控CD4+CD25+Tregs发育和生物学功能发挥的关键转录因子，具有下调免疫应答的功能。Foxp3突变或缺失会导致严重的自身免疫性疾病的发生。FOXP3基因突变的Scurfy（sf）小鼠表现为严重的皮炎，多器官淋巴细胞浸润以及自身免疫溶血性贫血，与TGF-β和CTLA-4缺陷鼠的表型相似，出生后约三周死亡。人类同源的FOXP3突变则会引起人类基因性突变的免疫失调、内分泌紊乱、肠病、X染色体性联综合症（IPEX）,表现为全面的免疫失调，带有自身免疫性内分泌病如早期发作的I糖尿病和甲状腺炎。此外，FOXP3还广泛的分布在多种肿瘤细胞中，参与肿瘤的发生及免疫逃逸。因此，FOXP3是一个重要的免疫调控因子。 虽然FOXP3是维持免疫平衡的重要转录因子，但是，FOXP3如何调控其下游靶分子的表达，目前仍未阐明。由于大部分转录因子功能的实现是通过蛋白与蛋白之间的相互作用，因此，进一步筛选与FOXP3相互作用的分子，研究它们之间相互作用的分子机制，可为进一步阐明FOXP3的调控机制提供新的解释。 2008年，我室姜昌丽博士利用酵母双杂交的方法，从人外周血白细胞cDNA文库中筛选获得了9个可能与FOXP3相互作用的分子，进一步的免疫共沉淀、酵母回交实验均证实泛表达转录子UXT与FOXP3之间存在相互作用。为了进一步探讨两者相互作用的位点及其相互作用的生物学功能，本课题我们共进行了以下三个方面的工作：首先，为了明确FOXP3与UXT的作用部位，我们根据FOXP3的结构特征，设计并构建了5个用于酵母双杂交的截短体；接着，我们分别通过酵母回交实验及哺乳动物双杂交实验来确定两者的相互作用位点；此外，我们还对UXT与FOXP3相互作用的生物学意义进行了初步的探究，通过荧光报告基因的方法检测FOXP3在UXT调节ER转录活性中的作用。通过本课题，我们得到了以下结果：①成功的构建了用于酵母双杂交的截短体，经双酶切和测序鉴定，与预期相符；②证实了FOXP3的N端脯氨酸富集区在两者相互作用中发挥着重要作用；③通过荧光报告基因证实了FOXP3可以抑制UXT对ER转录活性的促进作用。 综上所述，本课题通过酵母双杂交和免疫共沉淀的方法确定了FOXP3的N端脯氨酸富集区在两者相互作用中发挥着重要作用。并初步研究了两者的相互作用在肿瘤细胞中的功能，发现FOXP3可以抑制UXT对ER转录活性的促进作用，为进一步阐明FOXP3的转录调节机制奠定基础。