体外培养胃癌细胞株中miR-339对XEDAR基因表达的影响

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目的:研究不同胃癌细胞株和永生胃粘膜上皮细胞株中XEDAR的表达水平,评价miR-339的异常表达对人胃癌细胞及正常胃粘膜上皮细胞XEDAR基因表达的影响,阐明miR-339与XEDAR基因的作用关系。方法:本研究使用胃癌细胞株MKN-45、SGC-7901、BGC-823及永生胃粘膜上皮细胞株GES-1作为实验标本。采用SYBR Green I嵌合荧光法Real TimePCR技术和Western-blot技术分别检测上述细胞株中的XEDAR表达水平;转染外源性miR-339-3p mimics使miR-339-3p表达水平升高,并利用实时定量PCR和Western-blot技术检测转染前后XEDAR表达变化。结果:(1)采用实时定量PCR检测后显示:XEDAR在胃癌细胞株SGC-7901、 BGC-823、MKN-45的表达量分别为人正常胃粘膜上皮细胞株GES-1表达量的9.25、8.21和3.81倍;(2)在胃癌细胞株MKN-45中转染外源性miR-339mimics及相应阴性对照和转染试剂对照,同样应用实时定量PCR检测后显示:与阴性荧光对照相比,转染试剂组XEDAR在MKN-45细胞中的表达量为阴性对照的0.269倍;MOCK组XEDAR在MKN-45细胞中的表达量为阴性对照的0.346倍;(3)采用Western blot检测后显示:XEDAR在胃癌细胞株的表达量明显高于人正常胃粘膜上皮细胞株GES-1中的表达量,各胃癌细胞株中XEDAR表达无明显差异(4)在胃癌细胞株MKN-45中转染外源性miR-339mimics及相应阴性对照和转染试剂对照,同样应用Western blot检测后显示:与MOCK组相比,在实验组中XEDAR在MKN-45细胞中的表达量无明显变化;结论:永生胃粘膜上皮细胞株GES-1中XEDAR的表达较胃癌细胞株低。miR-339转染后XEDAR基因表达无明显变化。
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