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外切葡聚糖酶是纤维素酶的重要组分，是纤维素酶解过程中的限速酶。本实验筛选获得一株可以产生外切葡聚糖酶的短小芽孢杆菌AC-4，克隆获得其外切葡聚糖酶基因(Cbh)，并使其在甲醇毕赤酵母中实现表达。主要研究结果如下: (1)分离获得一株细菌AC-4，外切葡聚糖酶活力为0.625±0.003U/mL，其粗酶液的最适作用pH为9.5，最适作用温度为50℃。由形态学特征和16S rDNA序列分析，可以确定菌株AC-4为短小芽孢杆菌。 (2)经PCR扩增，获得了菌株AC-4的外切葡聚糖酶基因片段，其长度为2106bp，编码701个氨基酸，与菌株Bacillus pumilus SAFR-032的外切葡聚糖酶基因序列相似性为94％。 (3)将获得的Cbh基因片段与分泌表达载体pMETαA连接构建重组表达质粒pMETαA-Cbh，从而将基因Cbh成功整合到甲醇毕赤酵母菌株PMAD16中。SDS-PAGE分析显示Cbh基因在酵母菌细胞中成功表达，分子量约为78kDa。重组菌株NM-Cbh发酵培养后，外切葡聚糖酶活力可以达到5.4U/mL。