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研究背景和目的:干细胞治疗脑缺血疾病已逐渐应用于临床。目前经血液循环移植干细胞为常用的移植途径,其中以经静脉途径最为常见。但静脉途径移植干细胞存在到达缺血损伤区的细胞数量较少,而脑缺血病灶的干细胞数量浓度与疗效成正相关。目前神经介入技术方法治疗脑血管疾病已在临床上广泛应用。介入放射学的技术方法,将导管超选择至脑缺血损伤区域大脑供血动脉,已无临床瓶颈。对于脑梗塞患者,能否利用介入放射学技术手段,将导管超选至脑缺血损伤区的大脑动脉,经导管移植与静脉途径相同浓度的干细胞,并取得相应的疗效,或者优于临床常用的经静脉途径。经导管颈内动脉途径移植干细胞治疗脑梗塞,目前临床尚未应用。而且通过动物模型模拟该介入治疗方法,并是否优于静脉途径,亦尚无报道。因此,本研究目的是通过建立模拟介入技术方法治疗脑梗塞的动物模型(经导管颈内动脉灌注干细胞治疗脑缺血损伤动物模型),并利用MRI技术活体下无创性、动态示踪钆-二乙烯三胺五乙酸(Gd-DTPA)颗粒标识干细胞,观察经导管颈内动脉移植干细胞后脑缺血损伤区的面积及代谢物浓度变化,比较分析其疗效是否优于经静脉途径。为经导管颈内动脉灌注干细胞治疗脑缺血损伤应用于临床做准备。 材料与方法: 一、利用微导丝、微导管及介入超选技术,在30只SD大鼠(250-300g)制备新的大鼠脑局灶性缺血再灌注动物模型,通过动物神经行为学及MRI检查来证实该动物模型造模成功。 二、骨髓间充质干细胞(BMSCs)由SD大鼠双侧股骨骨髓中获取,培养、传代并纯化细胞,采用临床通用Gd-DTPA增强剂标识BMSCs;透射电子显微镜观察标识情况,并用台盼蓝染色方法及MTT法测定标识细胞的活力及增殖能力;用SD大鼠(250-300g),制备经导管颈内动脉灌注干细胞治疗脑缺血损伤模型(n=20);对标识的细胞进行体外以及脑缺血模型7.0T MRI成像;通过检测T1WI信号强度,比较经导管颈内动脉途径(n=10)与静脉途径(n=10)移植Gd-DTPA标识BMSCs治疗脑缺血损伤病变中心的干细胞浓度有无差异。 三、用 SD大鼠(250-300g),制备第一部分脑缺血损伤模型(n=30),包括经导管颈内动脉移植组(n=10)、经静脉移植组(n=10),空白对照组(n=10)。将 BMSCs经过血液循环(静脉、动脉)途径移植治疗脑缺血损伤,利用7.0T MRI无创性、动态的观察脑缺血损伤区面积及代谢物浓度变化,观察时间节点为:梗塞干预后12h、4d、7d。通过上述变化,探索BMSCs的早期作用机制,比较分析经导管颈内动脉灌注BMSCs治疗脑缺血损伤的疗效是否优于经静脉途径。 结果: 一、通过利用微导丝、微导管及介入超选技术,能顺利制备新型的大鼠脑局灶性缺血再灌注动物模型,并能经导管颈内动脉灌注干细胞。新的动物模型脑出血发生率为6.7%及2周内生存率为59.3%。 二、透射电子显微镜可清晰观察到Gd-DTPA颗粒大部分存在于骨髓间充质干细胞细胞浆中,少许贴于细胞膜上。台盼蓝染色方法证实标识之后细胞的存活率没有受到影响, MTT法证实标识之后对BMSCs增殖能力没有影响。体外试管扫描示标识细胞呈高T1WI信号强度,并且持续时间较久。在脑缺血损伤模型中标识的BMSCs逐渐沉积于病变区, T1WI显示经导管颈内动脉途径的脑缺血损伤区可见明显点状高信号聚集,且该途径的脑缺血损伤区T1WI信号强度明显高于经静脉途径。 三、(1)比较未行BMSCs移植动物模型脑缺血损伤区面积,经血液循环移植BMSCs治疗脑缺血损伤(IA组与IV组),病变区面积缩小较空白对照组明显;而IA组脑缺血损伤区面积缩小较IV组明显。(2)对大鼠脑缺血损伤病变中心为感兴趣区得到的1 H-MRS,通过CRLBs方法能测得可靠性物质浓度绝对量的代谢物为:Lac、NAA+NAAG、Cr+PCr。两组(IA组与IV组)大脑中动脉梗塞、干细胞干预后12h,脑缺血损伤病变中心感兴趣区测得Lac、NAA+NAAG绝对浓度较正常侧异常升高及降低。干预后随时间迁移(12h→4d→7d),Lac及NAA+NAAG绝对浓度分别逐渐降低及升高,而Cr+PCr绝对浓度变化不大。梗塞后12h,IA组与IV组的Lac/Cr+PCr及NAA+NAAG/Cr+PCr比值无显著性差异;干预后4d、7d,IA组的Lac/Cr+PCr及NAA+NAAG/Cr+PCr比值分别较IV组降低及升高明显。 结论:经导管颈内动脉灌注干细胞治疗脑缺血损伤动物模型,具备有局灶性脑缺血再灌注本质,以及后续药物、干细胞、基因载体等干预建立通道的功能。利用MRI技术无创性、动态的示踪Gd-DTPA标识的干细胞,以及观察脑缺血损伤病变区面积及代谢物浓度的变化。初步实验证明经导管颈内动脉移植干细胞可能为最佳移植途径;该途径移植干细胞治疗脑缺血损伤是可行的,其疗效明显优于经静脉途径。