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目的:本研究旨在探索TNF-α诱导的大鼠髓核细胞早衰发生中YAP的作用,探明Hippo信号通路在TNF-α诱导衰老的过程中调控YAP的机制,探究YAP在椎间盘退变中的作用。方法:(1)应用甲苯胺蓝染色法、HE染色和Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ)的荧光来鉴定提取的原代大鼠髓核细胞;(2)应用CCK8、半定量PCR、β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色和Western blot验证原代大鼠髓核细胞衰老模型的构建;(3)利用定量PCR和Western blot及免疫荧光分析TNF-α诱导的NP衰老细胞中Hippo信号通路发生的改变;(4)利用特异性药物Verteporfin抑制YAP,探明其在TNF-α诱导衰老过程中的调节机制;(5)利用Westernblot和β-半乳糖苷酶探究使用慢病毒过表达YAP后,NP细胞早衰指标的变化;(6)利用定量PCR、半定量PCR,免疫荧光技术和小动物MR探究YAP对大鼠尾椎髓核细胞变化的影响。结果:(1)通过三种与髓核细胞相关的相对特异性的染色验证所提取培养的原代细胞为大鼠髓核(NP)细胞;(2)40ng/ml的TNF-α激活p53-p21-pRb通路、降低髓核细胞的增殖,诱导出SA-β-gal阳性的大鼠衰老髓核细胞;(4)TNF-α诱导的早衰髓核中,Hippo信号通路被激活,导致YAP磷酸化增多,但相应TNF-α诱导后也导致YAP本身的产生增加,最终YAP蛋白表达增加,且YAP入核增多,活性增强。(5)使用特异性的YAP的抑制剂Verteporfin后发现,NP细胞中的p53.p21.pRb表达增加,使用SA-β-gal染色也发现,阳性细胞的占比相对于对照组也显著增加:(6)慢病毒过表达YAP后发现,NP细胞中的衰老相关蛋白p53.p21.pRb表达有所减少,并且mRNA水平上的Ⅱ型胶原蛋白和aggrecan的mRNA表达增加,MMP13相应的降低,而且SA-β-gal染色也发现,阳性细胞的占比相对于对照组比例减少,因此我们推测YAP蛋白在TNF-α诱导的NP细胞早衰中有抗衰老的作用。(7).进一步在体内实验中发现,注入YAP慢病毒可以缓解因针刺导致的大鼠尾椎的退变,可能有抗椎间盘退变的作用。结论:本研究显示了 YAP在TNF-α诱导的大鼠NP细胞早衰中的是作为抗衰老蛋白存在的,并且发现过表达YAP可能可以缓解针刺模型诱导的大鼠尾椎椎间盘的退变。这些发现提示YAP可能是延缓IDD进展的潜在治疗靶点。