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第一部分藤黄酸抑制类固醇激素受体共活化因子3及Akt通路介导慢性粒细胞白血病急变K562细胞株G0/G1期阻滞和凋亡目的:研究藤黄酸抗白血病的影响及其分子机制,为其临床应用提供理论基础。方法:采用MTT比色法检测K562细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡及透射电镜分析细胞凋亡形态学的改变,流式细胞术分析细胞周期改变,Realtime-PCR检测藤黄酸对K562细胞内SRC-3和Bcl-2基因表达的影响,Western blot法检测藤黄酸对K562细胞内SRC-3,Akt,pAkt,核糖体蛋白S6激酶1(S6K1),pS6K1,糖原合成激酶3β(GSK-3β),pGSK-3β和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:(1)藤黄酸以剂量、时间依赖性方式抑制K562细胞的增殖,其24 h的IC50是1.9±0.1μmol/L。(2)藤黄酸以剂量依赖性方式诱导K562细胞凋亡,伴有典型的凋亡细胞形态学改变。(3)藤黄酸阻滞K562细胞周期于G0/G1期。(4)藤黄酸能以剂量依赖性方式抑制SRC-3,pAkt,pS6K1,pGSK-3β和Bcl-2表达水平,而Akt,S6K1和GSK-3β总蛋白水平不受影响。结论:藤黄酸发挥其抗白血病效应可能与下调类固醇激素受体共活化因子3(SRC-3)的表达有关。第二部分鱼藤素抑制类固醇激素受体共活化因子3及NF-κB通路介导急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡目的:研究鱼藤素抗白血病的影响及其分子机制,为其临床应用提供理论基础。方法:采用MTT比色法检测Jurkat细胞的增殖活性,原位细胞凋亡检测技术(TUNEL)及透射电镜分析细胞凋亡形态学的改变,流式细胞术分析细胞周期改变,RT-PCR和Westem blot法检测鱼藤素对白血病细胞内SRC-3,NF-κB,Bcl-2,Bcl-xL基因和蛋白表达的影响。结果:(1)鱼藤素以剂量、时间依赖性方式抑制Jurkat细胞的增殖,其24 h的IC50是43.73±0.35 nmol/L,48h的IC50为28.96±0.29 nmol/L。(2)鱼藤素以剂量依赖性方式诱导Jurkat细胞凋亡。40 nmol/L的鱼藤素处理24 h后透射电镜观察到细胞染色质浓缩,核碎裂,典型凋亡小体形成。TUNEL法检测到TUNEL阳性细胞,40 nmol/L的鱼藤素处理24 h后TUNEL阳性细胞百分比为12.8±0.85%,与对照组(1.1±0.09%)相比有统计学意义(P<0.01);(3)鱼藤素阻滞Jurkat细胞周期于G0/G1期。(4)鱼藤素能同时在蛋白和基因水平,以剂量依赖性方式抑制SRC-3及其相关基因NF-κB和其下游的抗凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-xL的表达。结论:鱼藤素能明显抑制Jurkat白血病细胞的增殖,并诱导其凋亡,其抗白血病效应可能与下调类固醇激素受体共活化因子3(SRC-3)的表达有关。第三部分鱼藤素对多发性骨髓瘤细胞类固醇激素受体共活化因子3的调节作用目的:研究鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞抗增殖影响及其分子机制。方法:采用MTT比色法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞增殖活性的影响,Annexin-VFITC/PI双标法及Hoechst33258分析细胞凋亡形态学的改变,肿瘤细胞侵袭实验检测鱼藤素对RPMI-8226细胞侵袭作用的影响,RT-PCR法检测鱼藤素对SRC-3和NF-κB基因表达的影响,免疫组化法检测鱼藤素对SRC-3和NF-κB蛋白的影响和分布情况,明胶酶法用来检测RPMI-8226细胞分泌MMP-2和MMP-9酶的活性。结果:(1)鱼藤素能明显抑制RPMI 8226细胞的增殖,其24 h的IC50是54.55±0.40nmol/L。(2)鱼藤素以剂量依赖性方式诱导RPMI-8226细胞凋亡,伴有典型的凋亡细胞形态学改变。(3)鱼藤素能以剂量依赖性方式抑制RPMI-8226细胞侵袭。(4)鱼藤素能同时在蛋白和基因水平抑制SRC-3及其相关基因NF-κB,从而下调MMP-2和MMP-9酶的活性。结论:鱼藤素发挥其抗多发性骨髓瘤效应可能与下调SRC-3的表达有关。