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目的:探讨GPR35在乳腺癌中的具体作用,探究在乳腺癌细胞中GPR35调控miRNA-548a-3p对细胞生长和增殖的影响,为后续乳腺癌的相关研究提供理论依据。
方法:首先采用免疫组织化学染色方法检测GPR35在人乳腺癌及乳腺囊性增生组织中的表达,探讨乳腺癌组织中GPR35的表达与患者年龄、肿瘤直径和淋巴结阳性数等因素的关系。在动物实验中,用人乳腺癌MDA-MB-231细胞株皮下种植于昆明小鼠体内,构建乳腺癌模型,通过体内转染质粒的方法将过表达GPR35的基因序列转入到小鼠乳腺癌组织中,设置过表达GPR35a组、过表达GPR35b组和空载体组,采用qPCR和Western blot检测乳腺癌组织中GPR35的mRNA和蛋白表达,另外检测过表达GPR35后乳腺癌组织中miRNA-548a-3p的表达变化,最后提取转染成功的乳腺癌组织原代细胞,用MTT法检测过表达GPR35调控miRNA-548a-3p的变化对乳腺癌细胞生长增殖的作用。在细胞实验中,通过体外转染质粒的方法在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中转入GPR35过表达基因,同样采用qPCR和Western blot检测乳腺癌细胞中GPR35的mRNA和蛋白的表达,另外检测过表达GPR35后乳腺癌细胞中miRNA-548a-3p的表达变化,最后用MTT法检测过表达GPR35调控miRNA-548a-3p的变化对乳腺癌细胞生长增殖的影响。数据分析用算术平均数和标准差(-x±s)表示,两组之间的比较用t检验,两组以上的比较用方差分析,P<0.05时结果有统计学意义。
结果:GPR35在人乳腺癌组织中的表达呈阳性,在乳腺囊性增生组织中表达为阴性,GPR35的表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤直径和淋巴结阳性数有关(P<0.05)。动物实验和细胞实验结果显示在基因和蛋白水平上,过表达GPR35a组和过表达GPR35b组中GPR35的mRNA和蛋白水平明显高于空载组(P<0.05),其中过表达GPR35b组的mRNA和蛋白水平高于过表达GPR35a组(P<0.05);另外qPCR检测乳腺癌组织和乳腺癌细胞中过表达GPR35a组和过表达GPR35b组与空载组相比miRNA-548a-3p的表达水平明显降低(P<0.05),其中过表达GPR35a组较过表达GPR35b组降低更明显(P<0.05);MTT法细胞活性增殖实验表明,过表达GPR35a组和过表达GPR35b组的miRNA-548a-3p表达水平降低时乳腺癌细胞的增殖能力显著增强(P<0.05),其中miRNA-548a-3p水平越低,细胞的生长增殖能力相对越强。
结论:(1)GPR35在人乳腺癌组织中呈阳性表达,与乳腺癌临床病理特征及癌变等因素有关,GPR35可能成为乳腺癌研究的重要参考指标。(2)上调GPR35的mRNA和蛋白表达使miRNA-548a-3p的表达水平显著降低,对乳腺癌细胞的生长和增殖具有促进作用。
方法:首先采用免疫组织化学染色方法检测GPR35在人乳腺癌及乳腺囊性增生组织中的表达,探讨乳腺癌组织中GPR35的表达与患者年龄、肿瘤直径和淋巴结阳性数等因素的关系。在动物实验中,用人乳腺癌MDA-MB-231细胞株皮下种植于昆明小鼠体内,构建乳腺癌模型,通过体内转染质粒的方法将过表达GPR35的基因序列转入到小鼠乳腺癌组织中,设置过表达GPR35a组、过表达GPR35b组和空载体组,采用qPCR和Western blot检测乳腺癌组织中GPR35的mRNA和蛋白表达,另外检测过表达GPR35后乳腺癌组织中miRNA-548a-3p的表达变化,最后提取转染成功的乳腺癌组织原代细胞,用MTT法检测过表达GPR35调控miRNA-548a-3p的变化对乳腺癌细胞生长增殖的作用。在细胞实验中,通过体外转染质粒的方法在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中转入GPR35过表达基因,同样采用qPCR和Western blot检测乳腺癌细胞中GPR35的mRNA和蛋白的表达,另外检测过表达GPR35后乳腺癌细胞中miRNA-548a-3p的表达变化,最后用MTT法检测过表达GPR35调控miRNA-548a-3p的变化对乳腺癌细胞生长增殖的影响。数据分析用算术平均数和标准差(-x±s)表示,两组之间的比较用t检验,两组以上的比较用方差分析,P<0.05时结果有统计学意义。
结果:GPR35在人乳腺癌组织中的表达呈阳性,在乳腺囊性增生组织中表达为阴性,GPR35的表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤直径和淋巴结阳性数有关(P<0.05)。动物实验和细胞实验结果显示在基因和蛋白水平上,过表达GPR35a组和过表达GPR35b组中GPR35的mRNA和蛋白水平明显高于空载组(P<0.05),其中过表达GPR35b组的mRNA和蛋白水平高于过表达GPR35a组(P<0.05);另外qPCR检测乳腺癌组织和乳腺癌细胞中过表达GPR35a组和过表达GPR35b组与空载组相比miRNA-548a-3p的表达水平明显降低(P<0.05),其中过表达GPR35a组较过表达GPR35b组降低更明显(P<0.05);MTT法细胞活性增殖实验表明,过表达GPR35a组和过表达GPR35b组的miRNA-548a-3p表达水平降低时乳腺癌细胞的增殖能力显著增强(P<0.05),其中miRNA-548a-3p水平越低,细胞的生长增殖能力相对越强。
结论:(1)GPR35在人乳腺癌组织中呈阳性表达,与乳腺癌临床病理特征及癌变等因素有关,GPR35可能成为乳腺癌研究的重要参考指标。(2)上调GPR35的mRNA和蛋白表达使miRNA-548a-3p的表达水平显著降低,对乳腺癌细胞的生长和增殖具有促进作用。