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背景近年来随着抗生素的广泛应用，鲍曼不动杆菌的耐药状况令人堪忧，临床分离的鲍曼不动杆菌由早期的对大多数临床常用药物敏感逐步转变为对氨基糖苷类、喹诺酮类、头孢菌素、β-内酰胺酶抑制剂复方、碳青霉烯类五大类抗生素中的三类或三类以上耐药的多重耐药（Multi-drug resistant，MDR），甚至是泛耐药（Extensivedrug resistant，XDR）以及全耐药(Pan-drug resistant，PDR)。去年，国内有报道在临床分离的鲍曼不动杆菌中检出产NDM-1（新德里金属β内酰胺酶）的菌株，使得鲍曼不动杆菌跻身于“超级耐药菌”的行列。碳青霉烯类抗生素为新型β-内酰胺类药物，是治疗产ESBLs和（或）AmpC酶的革兰阴性杆菌的最有效用药。然而，根据CHINET监测网数据显示：2004-2005年鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为31.5%和40.7%，2007年对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为37.6%和42.7%，到了2010年亚胺培南和美罗培南的耐药率已经上升至57.1%，58.3%，由以上数据我们可以看出鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率逐年上升。碳青霉烯类抗生素也是治疗其它抗生素耐药造成的多重耐药鲍曼不动杆菌感染的最后一道防线，一旦鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药，即意味着对其它抗生素同样耐药，治疗上可能陷入“无药可治”的困境，人们也将面临“后抗生素时代”带来的恐慌。鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药机制包括：碳青霉烯酶的产生，外膜蛋白的低表达或者缺失，外排泵的过度表达等。以上耐药机制中研究最多的是碳青霉烯酶的产生，而对外排泵的研究较少。目的调查临床分离的鲍曼不动杆菌的临床分布以及对临床常用药物的耐药性，了解外排泵基因分布以及外排泵机制在碳青霉烯类抗生素耐药中的作用，为临床抗感染治疗以及院感控制提供依据，指导临床合理用药。方法采用纸片扩散法检测临床分离的383株鲍曼不动杆菌对15种抗生素的敏感性；琼脂稀释法检测74株碳青霉烯类耐药和31株敏感型鲍曼不动杆菌的MIC，并联合外排泵抑制剂（PAβN）进行外排泵表型检测，PCR扩增外排泵基因adeB，adeJ，abeM以及adeABC系统的调控基因短片段adeR，adeS；real time PCR检测碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌和敏感型鲍曼不动杆菌中的adeB，adeJ，abeM基因的mRNA表达水平，同时扩增adeABC系统的调控基因adeR, adeS全长片段，测序。结果383株鲍曼不动杆菌的药敏结果显示，氨曲南耐药率最高（85.3%），头孢哌酮-舒巴坦耐药率最低（28.0%），亚胺培南和美罗培南耐药率分别为57.3%和61.8%，除米诺环素耐药率为31.9%外，阿米卡星、庆大霉素、哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、环丙沙星、复方新诺明、哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟和左氧氟沙星耐药率均在60%以上。添加抑制剂PAβN后，60.81%的菌株对亚胺培南的MIC下降了416倍；有94.59%的菌株对美罗培南的MIC下降了416倍。74株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中adeB、adeJ、abeM基因检出率均为100%(74/74)，调控基因adeR基因检出率为95%(70/74)，adeS基因检出率为93%（69/74）。20株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的adeB的mRNA表达水平显著高于敏感株（P<0.01），而adeJ、abeM的mRNA表达水平与敏感株相比无显著差异（P>0.05）。从20株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中随机挑取3株进行全长调控基因adeR测序，发现第2639位碱基A→G，对应第219位氨基酸由AAA（赖氨酸）→GAA（谷氨酸），adeS无有义突变。结论1.临床分离的鲍曼不动杆菌标本来源以痰标本（73.6%）最多，感染科室以ICU分离率（25.1%）最高；临床分离的鲍曼不动杆菌耐药现象严重，治疗可选择头孢哌酮-舒巴坦或米诺环素；2.鲍曼不动杆菌中外排泵机制既参与对美罗培南的耐药，也参与对亚胺培南的耐药；3.外排泵基因adeB、adeJ、abeM普遍存在于鲍曼不动杆菌中，在碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中和敏感株中检出率差异具有统计学意义；4. adeABC外排泵过表达可能参与碳青霉烯类抗生素的耐药；其调控基因adeR第219位氨基酸由AAA（赖氨酸）→GAA（谷氨酸）的突变可能是其过表达的原因。5. adeIJK、abeM外排泵系统未参与碳青霉烯类抗生素的耐药。