【摘 要】
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目的:神经营养因子是能促进中枢和外周神经元存活、生长和分化的二聚蛋白因子.最新研究证实,神经营养因子与胃肠动力系统之间关系密切,一些神经营养因子可以加速结肠转运,但
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目的:神经营养因子是能促进中枢和外周神经元存活、生长和分化的二聚蛋白因子.最新研究证实,神经营养因子与胃肠动力系统之间关系密切,一些神经营养因子可以加速结肠转运,但其机制尚不清楚.肌电活动的记录是目前胃肠动力研究的重要方法之一,但如何使电极持久稳定的工作是这一技术的关键所在.该文对目前常用的、在肠壁缝植裸露银丝电极的电极埋植技术进行改进提高,并在大鼠中探讨鼠源性神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、大鼠基因重组脑源性神经营养因子(rat recombinant brain derived neurotrophic factor,rm-BDNF)及人重组神经营养因子-3(human recombinant neurotrophin-3,rh-NT-3)对大鼠胃肠动力及消化间期移行性复合肌电(migrating myoelectric complex,MMC)的影响,初步探讨神经营养因子影响胃肠动力的可能机制.方法:(1)选用外经仅0.5mm的聚四氟乙烯薄膜包绕的7股银丝绝缘导线制作记录电极,采用套针埋植电极.(2)应用改进的双电极埋植技术在大鼠的胃窦、十二指肠、空肠及结肠处手术,长期埋植4或5对银丝电极5-7天后,将实验大鼠编号后随机分组,分别在清醒空腹状态下通过尾静脉注射20 μg·kg<-1>的NGF、rm-BDNF、rh-NT-3或20 μg·kg<-1>的rh-NT-3+50μg/(kg·h)胆碱能M受体阻断剂阿托品、20 μg·kg<-1>的rh-NT-3+8mg/(kg·h)Ca<2+>阻滞剂硝苯吡啶、20μg·kg<-1>的rh-NT-3+1.5mL/h抗胃动素血清,或用于对照研究的安慰剂(250μg BSA)、0.2mL 生理盐水、1.0mg·kg<-1>西沙必利,记录各组空腹清醒大鼠在注射实验试剂前后各2小时的胃肠肌电活动.(3)以上实验过程中,在注射三种神经营养因子及对照试剂前后各20min采大鼠外周血,应用放免法检测P物质、胃动素浓度的变化.(4)放免法检测在注射20 μg·kg<-1>的rh-NT-3后15min,胃肠组织第二信使环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环鸟苷酸(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)含量的变化.(5)免疫组化EliVision二步法检测,神经营养因子低亲性受体NGFRp75及NT-3高亲性受体TrkC、NGF高亲性受体TrkA在胃肠道的分布情况.
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