核酸探针的化学发光及共振光散射分析

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核酸的分析在生命科学研究中具有重要的意义,广泛应用于分子生物学、生物化学和医学诊断等方面。核酸探针是一种通过与其靶分子进行特异性结合来检测靶分子的物质。它的靶分子除了传统意义上的核酸,还包括蛋白质、药物等等。 本文研究了Cy5标记的核酸探针的化学发光测定方法,为定量测定其靶分子提供了灵敏的检测手段;以金纳米粒子标记的DNA适配子为探针,测定了人α-凝血酶,建立了一种应用核酸探针与共振光散射技术测定蛋白质的新方法。本文分为两个部分: 第一部分:Cy5标记的核酸探针的化学发光分析。 Cy5是一种性能优良的荧光染料,被广泛用于标记核酸和抗体等生物分子。但是由于其stokes位移小,在荧光分析法中常常会受到激发光散射的干扰。本文研究了利用TCPO-H2O2化学发光体系测定Cy5标记的核酸探针的新方法,探讨了最佳分析条件。其线性范围为8.4×10-9~2.8×10-6mol/L,检出限为2.8×10-9mol/L。建立了操作简便、灵敏度高的测定Cy5标记的核酸探针的新方法。 第二部分:利用金纳米粒子标记的DNA适配子为探针测定凝血酶的共振光散射分析。 DNA适配子是一种特殊功能的寡核苷酸,它能与目标分子,包括核酸、蛋白质、药物等物质特异性结合,从而可以实现对目标分子的测定。本文选择了人α-凝血酶的两条不同的DNA适配子,将其标记上金纳米粒子,当其与人α-凝血酶相互作用时,金纳米粒子发生自组装,形成网状结构,导致共振光散射信号的增强,从而定量的测定了人α-凝血酶。这种方法简便易行,而且具有较高的灵敏度,为利用DNA适配子定量检测生物大分子建立了一种新的模式。
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