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本研究利用Real-time PCR方法检测成年绵羊和羔绵羊卵丘细胞中组织蛋白酶(CTSS、CTSB)mRNA的表达规律,并研究在成熟液中添加组织蛋白酶抑制剂E-64对组织蛋白酶mRNA的表达及其对卵母细胞受精后胚胎发育能力的影响,结果如下:绵羊卵丘细胞中CTSS、CTSB mRNA的表达水平随着体外成熟时间的延长而逐渐下降,成年绵羊卵丘细胞IVM 24h的CTSS、CTSB mRNA表达水平较IVM 0h分别下降了2倍和5倍,羔绵羊则分别下降了2倍和6倍。羔绵羊卵丘细胞中CTSS、CTSB mRNA表达水平在成熟各时间点均极显著高于成年绵羊(P< 0.01),羔绵羊卵丘细胞IVM 0h的CTSS、CTSB mRNA表达水平分别是成年绵羊的9倍和8倍;羔绵羊卵丘细胞IVM 24h的CTSS、CTSB mRNA表达水平分别是成年绵羊的7倍和8倍。成熟液中添加E-64可下调卵丘细胞中CTSS、CTSB mRNA的表达水平,10μmol/L E-64组IVM 24h的卵丘细胞中CTSS、CTSB mRNA表达水平均较对照组显著性降低(P<0.01)。在成熟液中添加1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L E-64组和对照组的成年羊卵母细胞的体外成熟率分别为81.76%、80.54%、83.89%和82.78%,组间差异不显著(P>0.05);各组卵裂率分别为53.89%、56.58%、55.35%和53.74%,组间差异不显著(P>0.05);但5μmol/L和10μmol/L E-64的囊胚发育率(26.82%、30.95%)显著高于对照组和1μmol/L组(15.63%、18.23%()P<0.05)。羔羊卵母细胞成熟液中添加10μmol/L E-64的体外成熟率(52.63%)与对照组(51.67%)无显著差异(P>0.05),但10μmol/L E-64组的卵裂率(14.5%)显著高于对照组(11.2%)(P< 0.05)。羔绵羊卵母细胞在体外成熟过程中各时期核相发展进程均较成年绵羊慢,且羔绵羊有一部分卵母细胞始终处于GV期,不能恢复减数分裂。绵羊卵丘细胞在IVM 8h扩散不明显,IVM 16h时逐渐扩散开,IVM 24h呈扩散状态。在成熟液中添加10μmol/L E-64有利于促进卵丘细胞的扩散。